中国药物与ｌ临床２０１５年４月第ｌ５卷第４期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ篷 ｉｎｉ！ Ｐ ！ ．！ ！ ． ・４６７・ 皮肌炎合并间质性肺疾病 与外周血淋巴细胞亚群的相关性研究 李希明智永芬赵丽军王彩虹李小峰 【摘要】 目的探讨皮肌炎（ＤＭ）患者外周血淋巴细胞亚群计数与其合并间质性肺疾病（ＩＬＤ）的关系。 方法选择皮肌炎患者５９例，用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞标记分子的绝对表达情况，分析皮肌炎合并间 质性肺疾病的患者与外周血淋巴细胞亚群计数，如Ｔ淋巴细胞（ＣＤ３ ），ＣＤ４ｑ＂细胞（即辅助性Ｔ细胞，Ｔｈ），ＣＤ８ｑ＇ 细胞（即抑制性／细胞毒性Ｔ细胞，Ｔｓ／ＣＴＬ），Ｂ淋巴细胞（ＣＤ３－／ＣＤ１９ ）、自然杀伤（ＮＫ）细胞（ＣＤ３－／ＣＤ１６＋ＣＤ５６ ）及 淋巴细胞总数（Ｔ＋Ｂ＋ＮＫ）计数及ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值的相关性。结果胸部高分辨率计算机断层扫描（ＨＲＣＴ）显示 ＣＤ４ｑ￣细胞异常增高是皮肌 ＩＬＤ的皮肌炎患者ＣＤ４ｑ＇细胞数目（６５２￣３９４）高于未合并ＩＬＤ患者（４２８＋３３１），且差异有统计学意义（尸＜Ｏ．０５）。皮 肌炎患者ＣＤ４＋Ｔ细胞数目升高与间质性肺疾病呈正相关（ｒ＝０．２６９，Ｐ＜０．０５）。结论炎患者合并间质性肺疾病的危险因素。对评估皮肌炎预后亦有指导意义。 【关键词】皮肌炎；淋巴细胞亚群；肺疾病，间质性；流式细胞术 Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｓｕｂｓｅｔｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｅｒ— ｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ Ｌｉ Ｘｉｍｉｎｇ＊Ｚｈｉ Ｙｏｎｇｆｅｎ，Ｚｈａｏ Ｌｉｊｕｎ，Ｗａｎｇ Ｃａｉｈｏｎｇ，Ｌｉ Ｘｉａｏｆｅｎｇ．＂Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＲｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＳｈａｎｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ ０３０００１，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｅｉｒｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｓｕｂｓｅｔｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒ— ｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ（ＩＬＤ）ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ（ＤＭ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｓｕｂｓｅｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｗｉｔｈ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｉｎ ５９ ＤＭ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＩＬＤ ｉｎ ＤＭ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｓｕｂｓｅｔ ｃｏｕｎｔｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｏｓｅ ｏｆ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｃｅｌｌｓ ＣＤ３ ，ＣＤ４ （Ｔ ｈｅｌｐｅｒ ｃｅｌｌｓ，Ｔｈ），ＣＤ８ （Ｉｎ— ｈｉｂｉｔｏｒｙ，Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ，Ｔｓ／ＣＴＬ），Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｃｅｌｌｓ（ＣＤ３。／ＣＤ １９ ），ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｉｌｓ（ＮＫ１（ＣＤ３／ＣＤ １６ ＣＤ５６ １ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｃｏｕｎｔ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｃｅｌｌｓ（Ｔ＋Ｂ＋ＮＫ）ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＣＤ４＋Ｔ／ＣＤ８＋Ｔ，ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ＤＭ ｐａ— ｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＩＬＤ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｃｈｅｓｔ ＨＲＣＴ．ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＣＤ４ ｃｅｌｌｓ ｆ６５２￣３９４１ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｗｉｔｈｏｕｔ ＩＬＤ （４２８＋３３１）（Ｐ＜Ｏ．０５）． ｒｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ＣＤ４＊Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＩＬＤ ｉｎ ＤＭ ｐａｔｉｅｎｔｓ（ｒ＝０．２６９，Ｐ＜０．０５）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＣＤ４＋Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ＩＬＤ ｉｎ ＤＭ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ｃａｎ ｂｅ ｃｌｉｎ－ ｉｃａｌｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＤＭ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ；Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｓｕｂｓｅｔｓ；Ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ；Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ 皮肌炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ，ＤＭ）是一种主要累及 疫异常可能是ＤＭ发生、发展的中心环节。Ｔ淋巴细 横纹肌炎性细胞浸润伴肌纤维变性、坏死为特征的 自身免疫性疾病，可伴有多种皮肤损害。临床上以 对称性肢带肌、颈肌及咽肌无力为特征，常累及多种 脏器，亦可伴发肿瘤和其他结缔组织病。其中肺部 受累是最常见的内脏器官病变，临床上常见的并发 症以间质性肺疾病（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ．ＩＬＤ）最 胞介导的细胞免疫可能是多发性肌肉组织损伤的主 要发病机制，Ｔ、Ｂ淋巴细胞参与的体液免疫在皮肌 炎发病中起到更重要的作用…。其淋巴细胞的表型 和功能变化对探讨该病的发病机制及改善预后具有 重要意义，在此我们将探讨皮肌炎患者合并间质性 肺疾病与患者外周血淋巴细胞亚群的相关性研究。 以期有利于临床指导治疗。 １对象与方法 为常见，是导致患者死亡的主要原因之一。皮肌炎 确切病因和发病机制尚未阐明。但众多研究提示免 ＤＯＩ：１０．１１６５５／ｚｇｙｗｙｌｃ２０１５．０４，００６ １．１研究对象：选取２０１３年９月至２０１４年９月我 院收治的皮肌炎５９例患者，全部病例均符合１９７５ 基金项目：山西省卫生厅科技项目（２０１２０１０７２） 作者单位：０３０００１太原，山西医科大学第二医院风湿免疫科（李 希明、赵丽军、王彩虹、李小峰）；山西医科大学公共卫生学院（智永 芬） 年Ｂｏｈａｎ和Ｐｅｔｅｒ关于ＤＭ／ＰＭ分类诊断标准。其中 皮肌炎合并ＩＬＤ患者４Ｏ例，男性８例，女性３２例， 年龄２０～５０岁，平均（４８＋１４）岁；对照组：选取均符 通信作者：王彩虹，Ｅｍａｉｌ：ｓｎｗｃｈ＠ｓｉｎａ．ｃｏｎ 中国药物与临床２０１５年４月第ｌ５卷第４期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ．Ａ口ｒｉｌ ２０１５．Ｖｏ１．１５．Ｎｏ．４ 合ＤＭ诊断标准但未合并ＩＬＤ患者１９例，男性５ 例，女性１４例，年龄２Ｏ～５０岁，平均（４１＋１４）岁。２组 患者性别、年龄差异无统计学意义。 １．２方法：淋巴细胞亚群计数的测定：①每个样本 标记２只管，使用字母Ａ、Ｂ区分开；②取２０ ｌ ＭｕｈｉｔｅｓｔＣＤ３／ＣＤ８／ＣＤ４５／ＣＤ４试剂加入标记为Ａ的 试管底部；③取２０ ｌ ＭｕｈｉｔｅｓｔＣＤ３／ＣＤ８／ＣＤ４５／ＣＤ１９ 试剂加入标记为Ｂ的试管底部；④吸取５０ ｌ均匀 混合的抗凝全血加入试管底部；⑤混匀并在室温 病例组，胸部ＨＲＣＴ正常为对照组，对有和无ＩＬＤ 的ＤＭ患者进行比较，分析患者一般资料、临床特 征、实验室和影像学检查，查血清标志物肌酶谱及自 身抗体ＡＮＡ、Ｊｏ一１抗体，并行肌电图检查，记录是否 有肌源性损害。 １．３统计学处理：采用ＳＰＳＳ１７．０软件进行统计学 分析。计量资料以ｘ＋ｓ表示．２组间均数比较采用两 样本ｔ检验，计数资料比较采用 检验，相关性 采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学 意义。 ２结 果 （２０—２５℃）避光条件下孵育１５ ｍｉｎ；⑥向试管中加 入４５０ ｌ的流式细胞荧光激活分选（ＦＡＣＳ）溶血 素，并在室温避光条件下孵育１５ ｍｉｎ，等待流式细 胞仪检测。 所有５９例皮肌炎患者均予肺高分辨率计算机 断层扫描（ＨＲＣＴ）。ＩＬＤ诊断：ＨＲＣＴ示弥漫性肺泡 间质浸润或蜂窝网格结节影。有间质性肺疾病归为 ２．１一般情况：见表１。２组年龄、性别、ＡＮＡ阳性 以及Ｊｏ—ｌ阳性均无明显差异（ ０．０５）。病例组肌源 性损伤率高于对照组且差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）。 表１皮肌炎患者的一般ｌ临床资料 注： 与对照组比较Ｐ＜０．０５ ２．２皮肌炎患者是否合并ＩＬＤ淋巴细胞亚群免疫 功能：表２结果显示，试验组ＣＤ４￣Ｔ细胞数高于对 照组，且差异有统计学意义（火０．０５）。除ＣＤ４ｑ＇细胞 外。Ｔ淋巴细胞、ＣＤ４＊Ｔ细胞、ＣＤ８＋Ｔ细胞、Ｂ淋巴细 胞、自然杀伤（ＮＫ）细胞、淋巴细胞总数（Ｔ＋Ｂ＋ＮＫ）计 数以及ＣＤ４＋／ＣＤ８ 比值在２组间差异均无统计学意 义（Ｐ＞０．０５）。 表２皮肌炎患者是否合并ＩＬＤ的淋巴细胞亚群计数的差异比较（ ） 注： 与对照组相比Ｐ＜０．０５ ２．３皮肌炎合并间质性肺疾病与淋巴细胞亚群计 数的相关性分析：见表３。ＤＭ合并间质性肺疾病与 ＣＤ４￣Ｔ细胞数呈正相关（尸＜Ｏ．０５）。 ３讨 论 皮肌炎是Ｊ临床常见且重要的结缔组织疾病，是 一临床早期预防有指导作用。但皮肌炎患者外周血淋 巴细胞亚群的测定对疾病活动度可能有更重要的意 义＿３］，然而皮肌炎患者外周血淋巴细胞亚群上具体 亚群与合并肺部疾病有密切的相关性相关报道说法 不一。迄今为止，皮肌炎患者外周血淋巴细胞亚群 的研究结论不一，考虑可能与研究人群、样本量和排 种以侵犯横纹肌为主，常伴有特征性皮疹并可累 及多个脏器的自身免疫性疾病。细胞及体液免疫反 应异常是其发生、发展的中心环节，其中一部分患者 可合并肺部疾病。与疾病活动度相关，并且影响ＤＭ 的治疗和预后。此前有研究报道Ｊｏ一１抗体阳性、发 热、关节炎（痛）、Ｇｏｔｔｒｏｎ征和ＡＮＡ阳性可作为皮肌 炎合并间质性肺疾病的主要预测因素［２］，这对我们 除标准等的不同有关。其次部分研究采用的是流式 细胞术外部影响因素较大。在皮肌炎患者的肌组织 和肌纤维中ＣＤ８ｑ＇细胞数减少，而ＣＤ４ｑ＇细胞等表 达升高，是导致皮肌炎免疫功能失调的主要原因之 本研究结果皮肌炎患者ＣＤ４ｑ＇细胞数目升高与 一。间质性肺疾病呈正相关。 中国药物与临床２０１５年４月第１５卷第４期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ａｐｒｉｌ ２０１５，Ｖｏ１．１５，Ｎｏ．４ 表３皮肌炎合并间质性肺疾病与淋巴细胞亚群相关性分析 Ｔｈ细胞在免疫系统中起重要作用。有淋巴细胞 且ＣＤ４￣Ｔ细胞的数目、分化可能是影响皮肌炎患者 与吞噬细胞之间的抗原决定簇的传递，传递抗原信 息，在免疫调节中产生多种细胞因子，促进Ｔ、Ｂ细 胞分化增殖，辅助Ｂ细胞产生抗体和诱导迟发性变 态反应。产生白细胞介素（ＩＬ），参与被感染细胞溶酶 引发肺部间质疾病的因素。 综上所述。外周血淋巴细胞亚群中ＣＤ４ｑ＇细胞 计数在评估皮肌炎合并肺脏受累有重要意义，对疾 病的治疗和预后有指导性意义．我们将深入探寻 体酶（酸性磷酸酶）的激活等作用。根据其表面单抗 受体、所产生的细胞因子和功能不同又可分为Ｔｈｌ、 Ｔｈ２、Ｔｈｌ７和调节性Ｔ细胞。Ｋｕｒａｓａｗａ等［ ］研究报道 合并肺间质纤维化炎性疾病患者的支气管一肺泡灌 洗液中淋巴细胞亚群比例明显异于无肺脏受累患 者，研究提示ｒｒ｝ｌ １型免疫反应在炎性疾病肺脏损伤 的病理机制中发挥重要作用。新近还有学者指出。 在皮肌炎患者的炎性肌肉组织中发现ＩＬ一１７Ａ的存 在，提示ＩＬ．１７Ａ与Ｔｈｌ７细胞的分化在皮肌炎等炎 性肌病发病中是一个重要的因素［５］。另一方面关于 Ｂ淋巴细胞的研究，Ｐｅｎｇ等［ ］证实在皮肌炎患者外 周血淋巴细胞的检测中发现Ｂ细胞活化因子 （ＢＡＡＦ）较健康者显著增多、活跃，提示ＢＡＡＦ与肌 炎活动度相关。王冬雪和于雪莹［ ］研究发现肌炎动 物模型的肺组织中浸润有大量Ｔ细胞和少量Ｂ细 胞，并且细胞浸润的程度与肌炎活动程度和肺脏损 伤程度均相关，提示Ｔ细胞和Ｂ细胞介导的免疫损 伤可能是造成炎性肌病肺脏损害的原因之一。我们 的研究表明，确诊的皮肌炎且合并间质性肺疾病患 者外周血淋巴细胞亚群中ＣＤ４＋Ｔ细胞数目高于胸 部ＨＲＣＴ正常的患者。可见皮肌炎患者体内Ｔ、Ｂ细 胞的异常是导致皮肌炎患者免疫紊乱的重要因素． ＣＤ４ 细胞（Ｔｈ亚群）平衡与皮肌炎患者脏器受累、 疾病活动、疗效检测及感染等的相关性。 参考文献 ［１］Ｒｅｅｄ ＡＭ，Ｅｍｓｔｅ Ｆ．ＣＩＭ￣Ｔｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｉｈｅｕ ｉｎ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｓｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｒｈｅｕｍ Ｒｅｐ，２００９，１１：２９５—３０１． ［２］陈芳，王国春．多发性肌炎，皮肌炎合并间质性肺疾病预测因素 的Ｍｅｔａ分析［Ｊ］．中华风湿病学杂志，２０１１，１５（８）：５８８—５９１． ［３］Ｉｓｈｉｉ Ｗ，Ｍａｔｓｕｄａ Ｍ，Ｓｈｉｍｏｊｉｍａ Ｙ，ｅｔ １ａ．Ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ＣＤ４￣ｒｌ／ＣＤ４ＣＦ２ ｂａｌａｎｃｅ ｉｎ ｐａ— ｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ ａｎｄ ｄｅｒｒｎａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒ Ｍｅｄ， ２００８，４７：１５９３—１５９９， ［４］Ｋｕｒａｓａｗａ Ｋ，Ｎａｗａｔａ Ｙ，Ｔａｋａｂａｙａｓｈｉ Ｋ，ｅｔ １ａ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｕｌ・ ｍｏｎａｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｅｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ．ｒｅｓｉｓｔｎａｔ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｍｕｎｏｌ，２００２，１２９：５４１－５４８． ［５］Ｍｏｒｎａ ＥＭ，Ｍａｓｔａｇｌｉａ ＦＬ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１７ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ— ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｌｆｎａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍ— ｐｌｉｅａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ Ｄｉｓｏｒｄ，２０１４，２４：９４３． ［６］Ｐｅｎｇ ＱＬ，Ｓｈｕ ＸＭ，Ｗａｎｇ ＤＸ．Ｂ．ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ａ ｓｅｒ０一 ｌ ｃａ１ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ 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