植物组织培养实验方案
一、实验仪器：
烧杯、三角瓶、玻棒、电子天平、药匙、量筒、三角瓶、镊子、剪刀、手术刀、酒精灯、容量瓶（1L）、PH试纸、移液管、牛皮纸、橡皮筋、培养皿、高压灭菌锅、无菌操作台
二、实验药品：
大量元素：钾KNO3、铵NH4NO3、磷酸二氢钾KH2PO4、硫酸镁MgSO4.7H2O、氯
化钙CaCl2.2H2O、钙Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾KCl 微量元素：硼酸H3BO3、硫酸锰MnSO4.4H2O、硫酸锌ZnSO4.7 H2O、钼酸钠Na2MoO4.2 H2O、硫酸铜CuSO4.5 H2O、氯化钴CoCl2.6H2O、碘化钾KI、浓硫酸Concentrated H2SO4 注：NB培养基中用浓硫酸代替碘化钾
铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 有机成分：肌醇Myo-inositol、盐酸硫胺素Thiamin HCl VB1、盐酸吡哆醇Pyridoxin HCl VB6、烟酸Nicotinic acid VB5或VPP、甘氨酸、泛酸钙Calcium pantothenate、腺嘌呤Adenine、L-半胱氨酸L-cysteine、生物素D-biotin 葡萄糖、琼脂
70%酒精，NaClO2%，0.1%生汞（HgCl2）
三、实验材料：
无性系菊科蒿属植物蒌蒿嫩茎、叶、根 四、实验步骤
1、培养基的配制
以MS为基本培养基，附加不同浓度的IAA、NAA和6-BA、琼脂0.7%，蔗糖3%，PH5.8~6.0，于121℃下灭菌20min，放置备用 2、外植体的取材与消毒
采取直径0.8cm左右的嫩芽、嫩茎、嫩根，用清水将其洗干净，再用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%HgCl2灭菌7min或者用2% NaClO浸泡30min，无菌水冲洗4~5次后备用。 3、接种培养
在无菌条件下，用手术刀切去部分枝叶，接种于诱导培养基上，诱导芽的分化。 4、培养条件
每天光照10h，光照强度为2000lx，温度25℃±1℃ 5、继代培养
待丛生芽生成后，将丛生芽切成单株接种到继代培养基（MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA）上
6、生根与移栽
待继代获得较多丛生芽后，将丛生芽切成单株，大部分接种到生根培养基
（MS+0.25mg/LNAA+0.25mg/LIAA）上，其余再继代一次。待生根后，将生根试管苗开盖炼苗，移栽。
五、实验结果与分析：
NB培养基 NB Medium
NB培养基产品价格
用途：用于植物组织培养 配方：（mg/L） 钾(KNO3) 硫酸铵((NH4)2SO4) 氯化钙(CaCl2·2H2O) 磷酸二氢钾(KH2PO4) 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 硼酸(H3BO3) 硫酸锰(MnSO4·4H2O) 硫酸锌(ZnSO4·7H2O) 钼酸钠(Na2MoO4·2H2O) 硫酸铜(CuSO4·5H2O) 氯化钴(CoCl2·6H2O) 碘化钾(KI) 乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA) 硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 肌醇(Myo-inositol) 盐酸硫胺素(Thiamin HCl/VB1) 盐酸吡哆醇(Pyridoxin HCl/VB6) 烟酸(Nicotinic acid/VB5) 产品用法： 称取本品 4.237 g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装 ,116℃高压灭菌 30min ,备用。 产品说明： 用于植物愈伤组织培养。 2830 463 166 400 185 3 10 2 0.25 0.025 0.025 0.75 37.25 27.85 100 10 1 1
钾 KNO3 铵 NH4NO3 大量元素 成分 101.11 80.04 236.16 74.55 136.09 246.47 61.83 223.01 287.54 241.95 249.68 237.93 372.25 278.03 205.6 123.11 342.31 分子量 200 480 470 150 550 250 0.5 3.0 0.5 0.025 0.025 0.025 0.5 μl 37.3 27.8 100 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.1 g/L g/L 使用浓度(mg/L) 钙 Ca(NO3)2.4H2O 氯化钾 KCl 磷酸二氢钾 KH2PO4 硫酸镁 MgSO4.7H2O 硼酸 H3BO3 硫酸锰 MnSO4.4H2O 硫酸锌 ZnSO4.7 H2O 微量元素 钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O 硫酸铜 CuSO4.5 H2O 氯化钴 CoCl2.62 浓硫酸 Concentrated H2SO4 铁盐 乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 硫酸亚铁 FeSO24.7H2O 肌醇 Myo-inositol 盐酸硫胺素 Thiamin HCl VB1 盐酸吡哆醇 Pyridoxin HCl VB6 有机成分 烟酸 Nicotinic acid VB5或VPP 泛酸钙 Calcium pantothenate 腺嘌呤 Adenine L-半胱氨酸 L-cysteine 生物素 D-biotin 蔗糖 sucrose 琼脂 agar 注：蝴蝶兰组培用 摘自：Micropropagation of Phaleanopsis and Doritaenopsis by culturing shoot tips of flower stalk buds. Plant cell report (1993)13:7-11
【求助】请教用作水稻愈伤诱导再生的CC培养基配方
以前用MS,N6基,现在做籼稻,需要用CC基,可是查了不少地方，都没有配方。 请有具体配方的战友告知,或者告知原始出处. PM偶。或者，EMAIL: daofu001@163.com
非常感谢!
以下为抄录
1，CC无机大量： 20×母液（g/L） KNO3 24.24 NH4NO3 12.80 KH2PO4 2.72 MgSO4.7H2O 4.94
CaCl2.2H2O/ CaCl2 11.16/8.8
2，CC无机微量I： 100×母液（g/200ml） MnSO4.4H2O/MnSO4.H2O 0.233/0.169 H3BO3 0.062 ZnSO4.7 H2O 0.115
3，CC无机微量II： 1000×母液（mg/500ml） KI 4.5 Na2MoO4 120 CuSO4.5 H2O 12.5 CoCl2.6H2O 14
4，CC有机 100×母液（g/100ml） VB1 0.17 VB6 0.02 烟酸 0.12 肌醇 1.8 甘氨酸 0.04
5，CC铁盐 100×母液（g/L） FeSO24.7H2O 2.78 Na2.EDTA 3.73
配制1L CC培养基，加 麦芽糖 20g 甘露醇 25g phytagel/ Agar 3g/8g VC 60mg
