维普资讯 http://www.cqvip.com 第２３卷第４期 ２ｔＸ）２年１Ｏ月 华南农业大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒｌａ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖ０１．２３．Ｎｏ．４ Ｏｃｔ．２０ｏ２ 文章编号：１００１—４１１Ｘ（２００２）０４—００８９—０１ 菜心离体培养植株再生的研究 程玉瑾，艾珂飞，黄颖茜，吴定华 （华南农业大学园艺学院，广东广州５１０６４２） Ｐｌａｎｔ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｐａｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ＣＨＥＮＧ Ｙｕ－ｊｉｎ，ＡＩ Ｋｅ—ｆｅｉ，ＨＵＡＮＧ Ｙｉｎｇ－ｑｉａｎ，ｗｕ Ｄｉｎｇ－ｈｕａ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｄｃｕｌｍｒｅ，Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｘｇｒｉｃ．Ｕｎｉｖ．，Ｇｕ咄关键词：菜心；离体培养；植株再生 Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｒａｓｓｉｃａ ｐａｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ＿０ ｕ ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ） 中图分类号：Ｑ８１３．１２ 文献标识码：Ａ 菜心（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｐａｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｂａｉｌ．）离体培养时，由于基因 （ＢＡ），不附加ＡｇＮ０３、ＧＡ３，植株再生是通过愈伤组织的再分 型的差异（ＡＡ基因型）较其他芸薹属作物更为困难，植株再 化实现的，其愈伤组织诱导率均达８０％以上，然而愈伤组织 生频率仅为１０％～３０％ 】』．离体培养的主要问题是愈伤组织 的质地及增殖情况有所不同．其中以Ｎ姐Ｏ．２ ｍｇ／Ｌ￣ＢＡ５．０ 分化频率低，在分化成苗时先产生根而抑制了芽的分化＿】’ ， 表１菜心“新选”不同外植体离体培养的反应 芽伸长困难，实验结果重复性差，不能满足遗传转化的需要． Ｔａｂ．１ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎ￣ｏｆ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｐａｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 本实验研究了不同外植体、培养基附加成份等因素对菜心离 ＸＩ 『ＡＮ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ 体培养植株再生和分化频率的影响，以Ａ 和ＧＡ３相配 合，获得了高频率、芽壮且多的再生植株，对保存种质、扩大 繁殖和遗传转化有一定的意义． １材料与方法 采用“新选”为试材。以真叶、子叶、子叶一子叶柄为外植 体，配制了ＭＳ培养基附加不同质量浓度的ＮＡＡ、２，４一Ｄ、 ＧＡ３、ＢＡ、ＡｇＮＯ３等培养基．脱分化、诱导愈伤组织培养基有 １．ＭＳ（１９６２）＋２，４一Ｄ（１．０、２．０ ｍｇ／Ｌ）＋ＢＡ（０、０．５ ｍｇ／Ｌ）、 ２．ＭＳ（１９６２）＋ＮＡＡ（０．２、０．５、１．０ ｍｇ／Ｌ）＋ＢＡ（０．５、２．０、３．５、 １）接种４周后调查 ５．０ ｍｇ／Ｌ）、３．ＭＳ（１９６２）＋ＮＡＡ（１．０ ｍｇ／Ｌ）＋ＫＴ（１．０ ｍｇ／Ｌ）． 分化培养基为１．ＭＳ（１９６２）＋ＮＡＡ（０．０１、０．２、１．０ ｍｇ／Ｌ）＋ＢＡ （２．０、３．５、５．０ ｍｇ／Ｌ）＋ＡｓＮＯ３（０、４．０ ｍｇ／Ｌ）、２．ＭＳ（１９６２）＋ ＮＡＡ（０．２、１．０ ｍｓ／Ｌ）＋ＢＡ（２．０、５．０ ｍｇ／Ｌ）＋ＧＡ３（０、０．２ ｍｓ／Ｌ） ＋ＡｇＮＯ３（０、４．０ ｍｇ／Ｌ）、３．ＭＳ（１９６２）＋ＮＡＡ（０．０１ ｒｒ螭／Ｌ）＋ＫＴ （０．８ ｍｇ／Ｌ）＋ＢＡ（１．６ ｍｇ／Ｌ）＋ＧＡ３（０．１ ｍｇ／Ｌ）．壮苗培养基 Ｓ（１９Ｍ６２）＋ＢＡ（１．０ ｍｇ／Ｌ）．生根培养基ＭＳ（１９６２）＋１Ａｎ（０、 ０．１ ｒｒ Ｌ）．整个过程在室温２５℃、光照度１ ４００～１ ８００ ｌｘ、每 日光照１０ ｈ左右条件下进行． ２结果与分析 ２．１不同外植体愈伤组织诱导、植株再生的比较 不同外植体对离体培养的反应不同．子叶．子叶柄对培 ｍｅ／Ｌ配合效果最好，即使不转培养基也能得到再生植株，但 愈伤组织易分化出根及根毛而抑制芽的再生，再生率不高， 仅为１８．４６％．另一种方式是当培养基中不仅附加生长素、细 胞素，同时加入一定量的ＡｓＮＯ３。菜心植株再生的方式为 外植体直接成苗，其愈伤组织的生长受到抑制而分生细胞团 的生长与分化比较旺盛． 由于ＡｓＮＯ￣的作用改变了菜心植株再生的方式，使植株 再生频率大幅度提高．本实验在ＡｓＮＯ３配合ＧＡ３的培养基上 分化频率高，分化出的芽壮且多（平均每个外植体长芽１Ｏ．３３ 个），明显优于只含有ＡｇＮＯ３的培养基（平均每个外植体长芽 ６．１４个），且以ＭＳ＋ＮＡ．Ａ１．０ ｍ＃Ｌ和ＢＡ２．０ ｍ＃Ｌ＋ＧＡ３ Ｏ．２ ｍｇ／Ｌ＋ＡｇｎＯ３ ４．０ ｍｇ／Ｌ的配合最好（５４．５５％）． 将上述分化出的芽丛或芽点转接于只含有ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ 的壮苗培养基上，芽丛２周后都生长到３ ５ ＣｌＴＩ高，且芽壮、 多，未转接的芽仅１～２ ａｍ，芽瘦弱、小．转接的芽丛伸长和生 长明显优于不经转接的，ＢＡ对芽的分化和伸长有促进作用． 将芽切下后转入生根培养基上均可发根得到再生植株．但 养基的反应最快，愈伤组织质地好，诱导率高，有直接从外植 以附加０．１ ｍｓ／Ｌ Ｉ从的培养基生根好于未加Ｉ从的ＭＳ培养基． 体分化出不定芽的现象，且子叶．子叶柄插植比平放更有利于 参考文献： 芽的再生（见表１）． ２．２不同培养基对外植体脱分化、再分化的影响 ［１］李开莲，李耿光，张兰英，等．菜心愈伤组织的诱导与植株 菜心离体培养时植株再生的方式有２种：一种是培养基 再生［Ｊ］．中国科学院华南植物研究所集刊，１９９０，６：８１—８６． ２］张鹏，凌定厚．提高菜心离体植株再生频率的研究［Ｊ］． 中只附加不同浓度的生长素（Ｉ从或ＮＡＡ）和细胞素 ［植物学报，１９９５，３７（１）：４１—４４． 收稿日期；２００２—０１—１４ 作者简介：程玉瑾（１９６７一），助理研究员，硕士． 【责任编辑柴 焰】
