亿学与生物Ｚ程２０１１，Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．１０ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—５４２５．２０１１．１０．０２０ 反胶束体系中固定化胃蛋白酶的催化性质研究 伏振字 ，李志光 ，何纯莲 （１．湖南农业大学理学院，湖南长沙４１０１２８；２．湖南师范大学医学院，湖南长沙４１０００６） 摘 要：将胃蛋白酶加至ＣＴＡＢ（十六烷基三甲基溴化铵）／环己烷／正辛醇反胶束体系中得到固定化胃蛋白酶，研究 了反胶束含水率、乙醇体积分数对固定化胃蛋白酶活力的影响，并对固定化胃蛋白酶和游离胃蛋白酶的催化性质进行了 比较研究。结果表明，反胶束含水率为１２ 、乙醇体积分数为３Ｏ 时，固定化胃蛋白酶的活力达到最佳；固定化胃蛋白 酶和游离胃蛋白酶的酶促反应最适温度分别为５Ｏ℃和４Ｏ℃、最适Ｃａ 浓度分别为０．０２ ｍｏ１．ＬＩ１和０．０１ ｍｏ１．Ｌ＿。； 对酪蛋白的米氏常数Ｋ 分别为ｌ＿２２×１０ ｍｏ１．Ｌ 和１．２９×１０ ｍｏｌ・Ｌ－。。固定化胃蛋白酶较游离胃蛋白酶具有 更高的酶活力、更好的热稳定性和储存稳定性。 关键词：胃蛋白酶；ＣＴＡＢ（十六烷基三甲基溴化铵）；反胶束；酶活力 中图分类号：Ｑ ８１４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—５４２５（２０１１）１０—００７５—０４ 反胶束酶反应系统是胶体界面化学与生物技术交 叉领域的研究内容口］。在非水有机介质中，对反胶束 体系酶催化性能的研究已受到广泛关注［２ ］。反胶束 体系包括３个组成部分：表面活性剂、水和非极性有机 质进行了比较，拟为反胶束中胃蛋白酶用于酶法测定 提供参考。 １ 实验 １．１试剂与仪器 胃蛋白酶，上海泛柯生物科技有限公司；酪蛋白， 溶剂。表面活性剂的极性头部指向含水微球的内部， 脂肪族的尾部指向非极性有机溶剂。在反胶束体系中 水结构的形成可能与生物膜类似 ，有资料指出，当酶 处在细胞内的环境中时，反胶束体系能够与周围的微 环境相适应 ］。 杭州微生物试剂有限公司；Ｌ一酪氨酸，西安沃尔森生物 技术有限公司；ＣＴＡＢ，湖南湘中化学试剂有限公司； 其它试剂均为分析纯。 ＷＦＺ８００一Ｄ３Ｂ型紫外可见分光光度计，北京瑞利 反胶束介质在宏观上为均一透明的热力学稳定体 系，在微观上则可视为由高度分散的单个反胶束聚集 分析仪器公司；空气摇床，上海智城分析仪器制造有限 公司；ＴＤＬ－４ＺＢ型台式低速自动平衡离心机，湖南星 体构成的非均一溶液，可为反应提供受纳米尺度 的介观环境，因而被视为纳米反应器的一种类型¨１］。 科科学仪器有限公司；ＺＳＤ－２型卡尔费休水分测定仪， 上海易友仪器有限公司；ＪＹ８８－ＩＩＮ型超声波细胞粉碎 机，宁波新芝生物科技股份有限公司。 １．２方法 近年来，随着纳米科学技术的迅速发展，反胶束作为纳 米反应器的优点也不断凸现［９ ，被视为很容易改变 酶的物理性质的微型反应器。人们通过改变这种环境 的物理性质，有可能在发生反应的“水池”里定制各种 性质的模型。 １．２．１ 胃蛋白酶溶液的制备 准确称量２５ ｍｇ胃蛋白酶，用ｐＨ一３的磷酸氢二 钠一柠檬酸缓冲溶液溶解并定容至５０ ｍＬ，即得０．５ ｍｇ・ｍＬ 的胃蛋白酶溶液。 １．２．２ 固定化胃蛋白酶的制备 ＣＴＡＢ反胶束体系的制备：称量９．０ ｇ ＣＴＡＢ，加 入３０ ｍＬ环己烷和１２０ ｍＩ 正辛醇，置于超声波细胞 胃蛋白酶在监测分析和食品工业中具有重要价 值。作者在此用ＣＴＡＢ（十六烷基三甲基溴化铵）／环 己烷／正辛醇反胶束体系固定胃蛋白酶，讨论了反胶束 体系含水率、乙醇体积分数对固定化胃蛋白酶活力的 影响，并对固定化胃蛋白酶与游离胃蛋白酶的催化性 收稿日期：２０ｌ１一Ｏ７ ２１ 作者简介：伏振宇（１９８７一），男，湖南人，硕士研究生，研究方向：生物酶催化性质，Ｅ—ｍａｉｌ：ｆｕｚｈｙ５６７＠１２６．ｃｏｒｎ；通讯作者：李志光，教 授，博士生导师，Ｅ ｍａｉｌ：ａ－０８８８８＠１６３．ｃｏｒｎ。 伏振字等：反胶束体系中固定化胃蛋白酶的催化性质研究／２０１１年簟１Ｏ期 粉碎机中溶解至无色透明，冷却后于４℃冰箱中保存。 取１０ Ｌ ０．５ ｍｇ・ｍＩ 一 的胃蛋白酶溶液和８０ ｇ ● “Ｌ ｐＨ＝３的缓冲溶液加至２．０ ｍＬ ＣＴＡＢ反胶束体 ３ 系中，用力振荡，置于恒温摇床中１８０ ｒ・ｍｉｎ＿。振荡 ２０ ｍｉｎ至无色透明，即制得胃蛋白酶反胶束。取９０ “Ｉ ８．０ ｍｇ・ｒｎＬ 的酪蛋白，加至２．０ ｍＩ ＣＴＡＢ反 胶束体系中，用力振荡，置于恒温摇床中１８０ ｒ・ｍｉｎ 振荡２０ ｍｉｎ至无色透明，即制得酪蛋白反胶束。 改变注入反胶束体系中缓冲溶液的体积，可以获 得不同含水率的胃蛋白酶反胶束和酪蛋白反胶束。为 测定助溶剂乙醇对固定化胃蛋白酶的影响，制备了不 同乙醇体积分数的胃蛋白酶反胶束和酪蛋白反胶束。 １．２．３ 固定化胃蛋白酶催化性质研究 为了避免胃蛋白酶与表面活性剂或有机溶剂接触 可能导致的酶变性，将胃蛋白酶反胶束和酪蛋白反胶 束进行混合，引发固定化酶的催化反应，以研究反胶束 体系中固定化胃蛋白酶的催化性质。 １．３分析测试 １．３．１ 酶活力的测定 酶活力定义：在一定条件下，每分钟催化水解酪蛋 白生成１／ｘｍｏｌ酪氨酸的酶量为一个蛋白酶活力单位。 在２５。Ｃ，用紫外可见分光光度计检测２７５ ｎｍ水 解酪蛋白的吸光度增加量。 １．３．２酶动力学参数的测定 酶动力学参数可由米氏方程测定： Ｖｍａｘｆ 一—Ｋ—ｍ￣Ｃ 式中： 为酶促反应速率； …为酶被底物饱和时 的反应速度；ｃ为底物浓度；Ｋ 为米氏常数，表示 一 （ｉ／２） 时的底物浓度。 ２结果与讨论 ２．１含水率对固定化胃蛋白酶活力的影响 ２５℃下，改变注入反胶束体系中缓冲溶液的体 积，获得含水率为７ ～１８％的胃蛋白酶反胶束和酪 蛋白反胶束，混合，引发酶促反应，然后用紫外可见分 光光度计检测２７５ ｎｌＴｌ水解酪蛋白的吸光度增加量， 考察含水率对固定化胃蛋白酶活力的影响，结果见图 １。 由图１可知，反胶束含水率为１２ ９／６时固定化胃蛋 白酶有最大的催化效率。当含水率低于１２ 时，酶活 力随着含水率的增加而上升；当含水率高于１２ 时， 酶活力随着含水率的增加呈现下降的趋势。这是因 为，在反胶束内，可能存在不同水结构的区域口 ，一个 姆 溢 删 回 含水率，％ 图１含水率对固定化胃蛋白酶活力的影响 Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉｃｅｌｌａｒ ｗａｔｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｎ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐｅｐｓｉｎ 区域的周围有表面活性剂的极性头部，而另一个区域 则是“水池”中间的自由水。在低含水率下，所有的水 被结构化，酶的稳定性较高；当含水率增加时，反胶束 的水结构会改变，固定化酶的活力相应升高，直至达到 最高；当含水率继续增加时，自由水的含量会增加，固 定化酶的活力和稳定性均会降低；在更高的含水率下， 由于反胶束体系的不稳定性导致固定化酶活力急剧下 降。 ２．２ 乙醇体积分数对固定化胃蛋白酶活力的影响 ２５℃下，将乙醇体积分数为０ 、１０ 、２０ 、 ３ｏ 、４ｏ 、５ｏ 的胃蛋白酶反胶束和乙醇体积分数为 ０％、１０ 、２０ 、３０ 、４０ 、５０ 的酪蛋白反胶束混 合，引发酶促反应，然后用紫外可见分光光度计检测 ２７５ ｎｍ水解酪蛋白的吸光度增加量，考察乙醇体积分 数对固定化胃蛋白酶活力的影响，结果见图２。 鲁 ● ＿Ｒ 蜒 溢 回 乙醇体积分数，％ 图２ 乙醇体积分数对固定化胃蛋白酶活力的影响 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐｅｐｓｉｎ 由图２可知，反胶束的乙醇体积分数为３Ｏ％时固 定化胃蛋白酶有最大的催化效率。当乙醇体积分数低 于３０％时，酶活力随着乙醇体积分数的增加而上升； 当乙醇体积分数高于３０ 时，酶活力随着乙醇体积分 数的增加呈现下降的趋势。这是因为，在较低乙醇体 积分数下，乙醇的助溶作用使胃蛋白酶进入到“水池” 伏振字等：反胶束体系中固定化胃蛋白酶的催化性质研究／２０１１年嗣１０期 中，从而避免了有机溶剂和表面活性剂对其活性位点 的抑制作用口 ，胃蛋白酶活力随乙醇体积分数的增加 而上升；而在较高乙醇体积分数下，由于反胶束体系的 不稳定性导致固定化胃蛋白酶活力下降。 ２．３游离酶和固定化酶的最适温度 不同温度下游离胃蛋白酶和固定化胃蛋白酶的相 对酶活力见图３。 Ｒ 蜒 避 按 温度／＇ｃ 图３温度对胃蛋白酶活力的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｅｐｓｉｎ 由图３可知，游离胃蛋白酶的最适温度为４０℃， 酶活力随温度的升高变化幅度较小；固定化胃蛋白酶 的最适温度为５０℃，酶活力随温度的升高变化幅度较 大。这表明固定化胃蛋白酶对温度变化较明显、敏感。 经固定化后，由于反胶束外层的非极性尾部对“水池” 中的胃蛋白酶有保护作用，使胃蛋白酶的热稳定性增 强，最适温度升高了１Ｏ℃。 ２．４游离酶和固定化酶的最适Ｃａ 浓度 向缓冲溶液中加入不同浓度的Ｃａ抖，配制成不同 浓度的含胃蛋白酶的Ｃａ 溶液，进行酶促反应，测定 酶活力，结果见图４。 Ｒ ！｝ｇ 髓 嚣 Ｃａ 浓度／ｍｏｌ・Ｌ。。 图４ Ｃａ２ 浓度对胃蛋白酶活力的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｅｐｓｉｎ 由图４可知，游离胃蛋白酶和固定化胃蛋白酶的 最适Ｃａ 浓度分别为０．０１ ｍｏｌ・Ｉ 和０．０２ ｔｏｏｌ・ Ｌ－。。加入一定浓度的Ｃａ 能使游离胃蛋白酶活力上 升，原因可能是在Ｃａ 存在下，酪蛋白的蛋白质结构 变得疏松，增加了胃蛋白酶作用的接触位点，酶活力相 应升高；但当Ｃａ抖浓度超过０．０１ ｔｏｏｌ・Ｌ 时，酶活力 反而呈现下降的趋势。而固定化胃蛋白酶活力只在一 个较窄Ｃａ。 浓度范围显著上升，当Ｃａ 浓度超过 ０．０２ ｍｏｌ・Ｌ 时酶活力反而降低。原因可能是 ＣＴＡＢ是阳离子表面活性剂，当加入过量的Ｃａ。 时， 反胶束内酶所处的微水环境的离子强度过高，会抑制 胃蛋白酶的活性 ］。 ２．５游离酶和固定化酶的动力学参数 分别配制不同浓度的酪蛋白溶液和酪蛋白反胶 束，进行酶促反应，测定游离胃蛋白酶和固定化胃蛋白 酶的动力学参数，采用双倒数法作图，结果见图５。 图５胃蛋白酶的Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ曲线 Ｆｉｇ．５ Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ ｐｌｏｔｓ ｏｆ ｐｅｐｓｉｎ 在２５℃、ｐＨ值为３的条件下，游离胃蛋白酶的 动力学参数为Ｋ 一１．２９×１０ ｍｏｌ・Ｌ～、 …一 ４．００×１０ ￣ｔｍｏｌ・Ｉ ・ｍｉｎ＿。；固定化胃蛋白酶的 动力学参数为Ｋ 一１．２２×１０ ｍｏｌ・Ｌ＿。、 …一 ２．６４×１０ ｔ￣ｍｏｌ・Ｌ ・ｍｉｎ＿。。固定化胃蛋白酶的 米氏常数Ｋ 比游离胃蛋白酶的小，说明反胶束体系 中固定化胃蛋白酶与底物的亲和力有所增大。 ２．６游离酶和固定化酶的储存稳定性 ２５℃下，游离胃蛋白酶和固定化胃蛋白酶的储存 稳定性见图６。 蜒 避 ‘靛 放置时间，ｄ 图６胃蛋白酶的储存稳定性 Ｆｉｇ．６ Ｔｈｅ ｓｔｏｒａｇｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｅｐｓｉｎ ａｔ ２５℃ 伏振字等：反胶束体系中固定化胃蛋白酶的催化性质研究／２０１１年囊１０期 由图６可知，固定化胃蛋白酶的储存稳定性比游 离胃蛋白酶的要好。２５℃放置５ ｄ后，固定化胃蛋白 酶保留３７ 的酶活力，而游离胃蛋白酶仅保留８％的 酶活力。这是由于反胶束能提供酶的天然环境嘲，能 够更好地保持酶的活性。 （３）：３１１ ３１８． —Ｐｕｙｏｕ Ｍ，Ｇ６ｍｅｚ—Ｐｕｙｏｕ Ａ．Ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｌｏｗ ｗａ— ［４］ Ｔｕｅｎａ ｄｅ Ｇ６ｍｅｚｔｅｒ ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ，１９９８，３３（１）：５３—８９． ｈｏ Ｃ Ｍ Ｌ，Ｃａｂｒａｌ Ｊ Ｍ Ｓ．Ｒｅｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｅｓ ａｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ［５３ Ｃａｒｖａｌｆｏｒ ｌｉｐａｓｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２０００，８２（１１）：１０６３—１０８５． ｃｅｌｌｅ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ａｓ ｔｏｏｌｓ ｏｆ ｅｎ— ［６］ Ｔｏｎｏｖａ Ｋ．Ｌａｚａｒｏｖａ Ｚ．Ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｍｉ３ 结论 研究表明，利用ＣＴＡＢ／环己烷／正辛醇反胶束体 系制备的固定化胃蛋白酶在反胶束含水率为ｌ２ 、乙 ｚｙｍｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｚｙｍｅ—ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ— ｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ，２００８，２６（６）：５１ ６ ５３２． Ｂｏｉｃｅｌｌｉ Ｃ Ａ，Ｃｏｎｔｉ Ｆ，Ｇｉｏｍｉｎｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｓ ｏｎ ｔｈｅ。 Ｐ ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｉｎ ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｍｉｃｅｌｌｅｓ ［Ｊ］．Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｉｍ Ａｃｔａ Ｐａｒｔ Ａ：Ｍｏｌ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃ，１９８２，３８（２）：２９９— ３００． 醇体积分数为３ｏ％时活力达到最佳。固定化胃蛋白 酶和游离胃蛋白酶的最适温度分别为５Ｏ℃和４Ｏ℃、 最适Ｃａ 浓度分别为０．０２ ｍｏｌ・Ｌ 和０．０１ ｍｏｌ・ Ｉ ～，对酪蛋白的米氏常数Ｋ 分别为１．２２×１０ ｍｏｌ ・［８］ Ｎｉｃｏｔ Ｃ，Ｖａｃｈｅｒ Ｍ，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｒｅ— ｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｅｓ：Ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ａ ｍｅｍｂｒａｎｅ—ｍｉｍｅｔｉｃ ｅｎｖｉ— ｒｏｎｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８５，２４（２４）：７０２４ ７０３２． Ｌ 和１．２９ ｘ １０ ｍｏｌ・Ｌ～。固定化胃蛋白酶较 ［９］ 冯绪胜，刘洪国，郝京诚．胶体化学［Ｍ］．北京：化学工业出版社， ２００５ １１８３ ２０２． 游离胃蛋白酶具有更高的酶活力、更好的热稳定性和 储存稳定性。 参考文献： ［１］ 梁运姗，袁兴中，曾光明，等．表面活性剂在逆胶束酶反应系统中 的作用机制［Ｊ］．中国科学：化学，２０１ｌ，４１（５）：７６３～７７２． Ｌｕｉｓｉ Ｐ Ｌ，Ｇｉｏｍｉｎｉ Ｍ，Ｐｉｌｅｎｉ Ｍ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｅｓ ａｓ ｈｏｓｔｓ ［１Ｏ］ 钟克利，尹炳柱，金龙～．胶柬作为纳米反应器的研究进展［Ｊ］． 高分子通报，２００９，（２）：４８—５７． ［ｉ１］ 中国药典委员会．中华人民共和国药典［Ｍ］．北京：科学出版社， ２０００：４６６－４６７． ［１２］ ＢＦＬＩ Ｒ，Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｆｅｒｒｅｒ Ａ，Ｇａｒｃｉａ Ｃａｒｍｏｎａ Ｆ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｍｏｄｅｌｓ ｉｎ ｒｅｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，１９９５，３１０：７２卜７３９． ｅｒａ—Ｖｅｌｄｚｑｕｅｚ Ｓ，Ｃａｄｅｎａｓ Ｃ，ｅｔ ａ１． ［１３］ Ｍａｒｈｕｅｎｄａ—Ｅｇｅａ Ｆｒｕｔｏｓ Ｃ，ＰｉＲｅｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｅｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ：Ａ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎ— ｏｌｏｇｉｅａｌ ｕｓｅ ｏｆ ｅｘｔｒｅｍｅ ｈａｌｏｐｈｉｌｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｔ ｌｏｗ ｓａｌｔ ｅｏｎｃｅｎｔｒａ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１９８８， ９４７（１）：２０９ ２４６． ［３］ Ｄｏｒｄｉｃｋ Ｊ Ｓ，Ｋｈｍｅｌｎｉｔｓｋｙ Ｙ Ｉ ，Ｓｅｒｇｅｅｖａ Ｍ Ｖ．Ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９８，１ ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｒｃｈａｅａ，２００２，１（２）：ｌ０５—１１１． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｃａｔａｌｙｔｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ｏｆ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｐｅｐｓｉｎ ｉｎ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｍｉｃｅｌｌｅｓ ＦＵ Ｚｈｅｎ—ｙｕ ．ＬＩ Ｚｈｉ—ｇｕａｎｇ ．ＨＥ Ｃｈｕｎ—ｌｉａｎ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｕｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０００６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｅｐｓｉｎ ｗａｓ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ ｉｎ ｒｅｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｅｓ ｏｆ ＣＴＡＢ（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）ｉｎ ｃｙｃｌｏ～ ｈｅｘａｎｅ ｗｉｔｈ ｏｃｔａｎｏ１ ａｓ ｃｏ—ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏ１ ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｓ ｏｎ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐｅｐｓｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｆｒｅｅ ａｎｄ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐｅｐｓｉｎ ｗｅｒｅ ｉｎ～ ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐｅｐｓｉｎ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｗｈｅｎ ｗａｔｅｒ ｃｏｎ— ｔｅｎｔ ｗａｓ １２％，ｅｔｈａｎｏｌ ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ３０ ；ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ａｎｄ ｆｒｅｅ ｐｅｐｓｉｎ ｗａｓ ５Ｏ℃ａｎｄ ４０℃，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ Ｃａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ０．０２ ｍｏｌ・Ｌ ａｎｄ ０．０１ ｍｏｌ・Ｉ 一 ，ｔｈｅ Ｋ ｗａｓ １．２２× １０～ ｍｏｌ・Ｌ一 ａｎｄ １．２９×１０～ ｍｏｌ・Ｌ～ ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｔｈｅｒｍａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐｅｐｓｉｎ ｗｅｒｅ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｆｒｅｅ ｐｅｐｓｉｎ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｅｐｓｉｎ；ＣＴＡＢ（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）；ｒｅｖｅｒｓｅ ｍｉｃｅｌｌｅｓ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ 全球最大制冷剂生产基地落户漯河 ２０１１年９月７日，河南漯河郾城区与富铭集团举行共建漯西工业园区签约仪式。据悉，工业园总投资 ３００亿元，全部建成后，将形成４０万ｔ新型制冷剂、１００万ｔ烧碱、１０万ｔ氟化工产品的规模，年产值可达５００亿 元，有望成为全球最３ｖ，，１冷剂生产基地和氟化工产业园区之一。 （摘编）
