靶向硫酸庆大霉素的制备及体外抗菌试验

动物医学进展，２００８，２９（１）：３６—３８，５２　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　靶向硫酸庆大霉素的制备及体外抗茵试验　卓如意，董　伟，张　旭，孙志良　（湖南农业大学动物医学院，湖南长沙４１０１２８）　摘　要：将硫酸庆大霉素与抗大肠埃希菌抗体用化学修饰荆进行偶联，再经化学方法处理，按制剂学　原理制备成靶向硫酸庆大霉素。用硫酸庆大霉素做对照，进行体外抗菌试验，检测靶向硫酸庆大霉素对大肠　埃希菌的抗菌效果。结果表明，靶向硫酸庆大霉素的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）为０．０２／￣ｇ／ｍＬ，硫酸庆大霉素的　最低抑菌浓度（ＭＩＣ）为０．４／￣ｇ／ｍＩ　，靶向硫酸庆大霉素的抑茵效果明显优于硫酸庆大霉素。　关键词：靶向硫酸庆大霉素；大肠埃希菌；最低抑菌浓度　中图分类号：￥８５９．７９６　文献标识码：Ａ　文章编号：ｌ００７—５０３８（２００８）０１—００３６—０３　靶向给药系统（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｄｒｕｇ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｓｙｓｔｅｍ，　器、电子天平、培养皿。　１．２　方法　ＴＤＤＳ）或称靶向制剂，诞生于２０世纪７０年代。早　期的ＴＤＤＳ主要是针对癌症的治疗药物，随着研究　的深入，ＴＤＤＳ被扩展到“运载”多种药品来治疗不　同疾病，高分子与药物偶联是靶向药物研究中的重　要方向之一［１　］。本研究通过将硫酸庆大霉素与抗　大肠埃希菌抗体偶联，制备出专一针对大肠埃希菌　的兽用靶向硫酸庆大霉素，由抗大肠埃希菌抗体寻　找和捕捉大肠埃希菌，由硫酸庆大霉素抑制和杀灭　１．２．１靶向硫酸庆大霉素药液的制备　参照文献　［６—９］，按５：ｌ比例称取化学修饰剂和硫酸庆大霉　素原粉，加入到３　ｍＬ血清抗体中，再加生理盐水至　４５　ｍＬ，按无菌操作法，在适宜的条件下搅拌，使之　充分混合、溶解，于４℃冰箱中放置２４　ｈ后，弃去上　清液，将沉淀用４５０　ｍＬ生理盐水充分溶解，即制得　靶向硫酸庆大霉素溶液，对其性状进行观测，将制备　的靶向药物放入冰箱冷藏备用。　大肠埃希菌，使其对大肠埃希菌进行“精确打击”，以　此增强硫酸庆大霉素的抗菌效果，从而在对动物大　肠埃希菌病的治疗上，减少硫酸庆大霉素的用药量　和降低其毒副作用，以期达到高效、低毒、低残留的　目的。　１材料与方法　１．１　材料　．　１．２．２硫酸庆大霉素药液的制备　参照文献［１ｏ３，　称取硫酸庆大霉素原粉０．４　ｇ，定容至１００　ｍＬ水蒸　馏中，制备成４　ｍｇ／ｍＬ的硫酸庆大霉素药液，备用。　１．　３　体外抑菌试验　参照文献［１１］进行。　１．２．３．１　菌液制备　将保存的大肠埃希菌菌种接　种于营养肉汤培养基中，３７℃恒温箱中培养２０　ｈ　后，菌液用生理盐水按ｌ０倍顺序稀释，分别接种于　１．１．１　药物与试剂　硫酸庆大霉素原粉由湖南金　方堂药业有限公司提供；抗大肠埃希菌抗体为自制，　用大肠埃希菌灭活疫苗免疫家兔制得。　１．１．２菌种　大肠埃希菌购自湖南省微生物研究　所。　琼脂平板，置３７℃培养２０　ｈ，计算菌落数目，选择合　适浓度将菌液稀释使细菌浓度在ｌ　０。ｃｆｕ／ｍＬ～　ｌ０。ｃｆｕ／ｍＬ，备用。　１．２．３．２最低抑菌浓度（ＭＩＣ）测定　采用试管１０　普通琼脂和肉汤培养基，按常规方　倍稀释法。设Ａ、Ｂ两组试管，每组ｌ１支，按顺序编　ｌ，１．３培养基法配制。　为ｌ号～ｌｌ号，各试管均加入４．５　ｍＬ稀释菌液（菌　超净工作台（ＳＷ—ＣＪ一２ＦＤ型，苏　液浓度为１０　ｃｆｕ／ｍＬ￣１０　ｃｆｕ／ｍＬ），在Ａ组的ｌ号　１．１．４主要仪器州净化设备公司）、恒温恒湿培养箱（ＬＲＨ一２５０一Ｓ，广　东省医疗器械厂）、全自动立式电热压力蒸汽灭菌器　（ＹＸＱ—ＬＳ一５０ＳＩＩ，上海博迅公司医疗设备厂）、移液　试管中加入０．５　ｍＬ制备的靶向硫酸庆大霉素药　液，在Ｂ组的ｌ号试管中加入０．５　ｍＩ　制备的硫酸　庆大霉素药液，均按ｌ０倍稀释法稀释至第８管，每　收稿日期：２００７—０９—２９　基金项目：湖南省科技厅基金项目（２００７ＮＫ３０８７）　作者简介：卓如意（１９７２一）。男（土家族），湖南慈利人。硕士研究生，主要从事兽医药理与毒理学研究。＊通讯作者　维普资讯 http://www.cqvip.com

卓如意等：靶向硫酸庆大霉素的制备及体外抗菌试验　３７　组均设药物对照管、菌液对照管和空白对照管，置　３７℃恒温箱中培养，以目测法与对照组比较，如加　入细菌的药液试管仍为澄清，即表示无细菌生长，则　该管药物浓度有抑菌作用；如为混浊，即表明细菌已　生长，该浓度药物无抑菌作用。以完全无细菌生长　的最低药物浓度作为细菌对该药物的敏感度，即为　该药物ＭＩＣ。　２．２将制备的靶向硫酸庆大霉素、抗大肠埃希菌抗　体及抗大肠埃希菌抗体、硫酸庆大霉素与化学修饰　剂的混合物分别进行非变性的聚丙烯酰胺凝胶电　泳，结果见图ｌ。　从非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果图片中可　以看到，在蛋白Ｍａｒｋｅｒ、抗大肠埃希菌血清抗体及　抗大肠埃希菌血清抗体、硫酸庆大霉素与化学修饰　剂的混合物的电泳中均出现抗大肠埃希菌抗体的条　１．２．３．３最小杀菌浓度（ＭＢＣ）的测定　采用平皿　菌落计数法。将Ａ、Ｂ两组无菌生长的试管中的混　带，但是在靶向硫酸庆大霉素的电泳中抗大肠埃希　合液分别取０．１　ｍＬ接种于平皿琼脂培养基上，置　菌抗体的条带却消失了（图中箭头ｌ所示），而在分　３７℃恒温箱中培养２０　ｈ，菌落计数，低于５个的平　子量更大的位置出现了一条其他电泳液中没有出现　皿所对应的药物浓度为该药物的杀菌浓度，浓度最　的条带（图中箭头２所示），说明抗大肠埃希菌抗体、　低者即为该药物ＭＢＣ。　硫酸庆大霉素及化学修饰剂发生了结合，形成了比　２　结果　抗大肠埃希菌抗体分子量更大的复合物。　２．１制备的靶向硫酸庆大霉素药液为澄清透明溶　２．３　大肠埃希菌血清抗体和靶向硫酸庆大霉素电　液，其ｐＨ在５．５～６．５之间，靶向制剂中硫酸庆大　镜扫描观察结果，见图２和图３。　霉素的含量为２　ｍｇ／ｍＬ。　Ａ　Ｂ　Ｃ　Ｄ　大肠埃希菌　血清抗体　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｂｌｏｏｄ—　ｓｅｒｕｍ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ａ．蛋白分子质量标准ｌ　Ｂ．抗大肠埃希菌抗体；Ｃ．靶向硫酸庆大霉素ｌ　Ｄ．抗大肠埃希菌抗体、硫酸庆大霉素及化学修饰剂的混合物　Ａ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　ＭａｒｋｅｒＩ１３．Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．ｃｏｌｉ　Ｉ　Ｃ，Ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ￣Ｄ．Ｔｈｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．∞｝ｉ。ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ａｇｅｎｔｉａ　图１　聚丙烯酰胺凝胶电泳　Ｆｉｇ．１　Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ　ｇｅｌ　ｅ１ｅｃｔｒ０ｐｈ０ｒｅｓｉｓ　图２抗大肠埃希菌抗体电镜观察　图３靶向硫酸庆大霉素电镜观察　Ｆｉｇ．２　Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．∞　ｕｎｄｅｒ　Ｆｉｇ．３　Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｇｅｎｔａｍｉｃｌｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｕｎｄｅｒ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｏｐｅ　维普资讯 http://www.cqvip.com

３８　动物医学进展　２００８年　第２９卷第ｌ期（总第１７３期）　２．４靶向硫酸庆大霉素药液的最低抑菌浓度及最小杀菌浓度见表１和表２。　表１最低抑菌浓度　Ｔａｂｌｅ　１　Ｍｉｎｉｍａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｍｇ／ｍＬ　菌液对照Ａ组Ｇｒｏｕｐ　Ａ　２×１０—１　２×１０－。　２×１０一。　２×１０一　２×１０－５　２×１０一　２×１０一　２×１０一　Ｂｃａｔｅｒｉａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　药物对照Ｄｒｕｇ　ｃｏｎｔｏｒｌ　空白对照　Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　抑菌效果　对　组　一　＋　＋　＋　＋　４×１ｏ一　４×１０－。　４×１０　４×１０－４　４×１０－　４×１０　４×１０叶　４×１０－８　ｒ、乙ＯｎｔｒｏＩ　ｇｒｏｕＰ　Ａ　抑菌效暑　一　ｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　一　～　、　一　＋　’　＋　’　＋　　’＋　　’＋’　注：①Ａ组为靶向硫酸庆大霉素药物的浓度｛②对照组为硫酸庆大霉素药物的浓度；③“一”表示细菌生长受抑制，培养液清亮｛④“＋”表　示有细菌生长，培养液混浊。　Ｎｏｔｅ：①Ｇｒｏｕｐ　Ａ　ｉｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅ｛②Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅｌ③“一”Ｉｍｐｌｙ　ｂａｃｔｅｒｉ－　ｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ　ＷａＳ　ｉｎｈａｂｉｔｅｄ，ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｌａｒｉｔｙ；④“＋”Ｉｍｐｌｙ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ，ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ，　表２最小杀菌浓度　Ｔａｂｌｅ　２　Ｍｉｎｉｍａｌ　Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｍｇ／ｍＬ　注：①Ａ组为靶向硫酸庆大霉素药物的浓度；②对照组为硫酸庆大霉素药物的浓度｛③“一”表示无细菌生长。　Ｎｏｔｅ：①Ｇｒｏｕｐ　Ａ　ｉｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅｌ②Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅ；③“一”Ｉｍｐｌｙ　ｎｏ　ｂａｃｔｅ—　ｒｉｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ．　由表ｌ和表２可知，靶向硫酸庆大霉素药液的　ＭＩＣ为０．０２　ｔＬｇ／ｍＬ，平皿培养各培养皿均无细菌生　长，各抑菌浓度均呈现杀菌效果，ＭＢＣ为　０．０２　ｔ￣ｇ／ｍＬ；硫酸庆大霉素药液的ＭＩＣ为　０．４　Ｍｇ／ｍＬ，平皿培养各培养皿上的菌落数均多于５　个，不呈现杀菌效果。　３讨论　靶向硫酸庆大霉素具有很好的体外抑菌作用和　强大的体外杀菌作用。硫酸庆大霉素与抗大肠埃希　菌抗体偶联后，由于抗大肠埃希菌抗体能特异性地　与大肠埃希菌结合，由抗大肠埃希菌抗体携带的硫　酸庆大霉素能更好地发挥其抗菌作用，呈现良好地　［Ｊ］．生物医学工程研究，２００４，２３（４）：２４９—２５２．　［３］刘新垣．癌症靶向治疗的最新进展［Ｊ１．中华肿瘤防治杂志，　２００６，１　３（１８）：１３６ｌ＿１　３６４．　［４］Ｓｉｎｇｅｒ　Ｊ　Ｗ，Ｄｅ　Ｖ　Ｐ，Ｂｈａｔｔ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｍｐｔｏｔｈ—　ｅｃｉｎｓ　ｔｏ　ｐｏｌｙ（１２ｇｌｕｔａｍｉｃ　ａｃｉｄ）［Ｊ］．Ａｎｎ　ＮＹ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ．２０００，　９２２｛１　３６—１５Ｏ．　［５］Ａｖｉｃｈｅｚｅｒ　Ｄ，Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒ　Ｂ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｐｏｌｙｍｅｒｓ　ｉｎ　ｄｒｕｇ　ｄｅｌｉｖｅｒ—　Ｙ：ｃａｒｒｉｅｒ　ｓｕｐｐｏｒｔ　ＣＤＤＰ（ｃｉｓ—ｐｌａｔｉｎ）ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｃａｒ－ｂｏｘｙ—　ｌａｔｅｓ—ｅｌｅｃｔ　Ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｏｖａｒｉａｎ　ｃａｒｅｉｎｏｒｒｋａ［Ｊ］．Ｒｅａｃｔ　Ｆｕｎ　Ｐｏｌｙｍ，　１９９８，３６（１）：５９２－６９１．　ｒ６］胡伟贞，由雪娟．用聚乙二醇沉淀法粗提纯植物病毒［Ｊ］．植物　检疫，１９８９，３（３）：１　７３—１　７６．　［７］史建英，沈世刚．聚乙二醇对人血清ＩｇＧ的化学修饰及修饰后　性质的研究［Ｊ］．离子交换与吸附，１９９４．（２）：１０１一ｌＯ７．　抑菌和杀菌效果，其抑菌和杀菌效果均优于单纯的　［８３徐风华．蒋雪涛．单克隆抗体一表阿霉素免疫偶合物的制备和体　外活性［Ｊ］．药学学报，１９９６．３１（８）：６３２—６３６．　硫酸庆大霉素。靶向硫酸庆大霉素对大肠埃希菌的　作用具有药量小、效果好和作用完全等特点，有很好　［９］　Ｂｈａｔｔ　Ｒ，Ｄｅ　Ｖ　Ｐ．Ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍｉｃ　ａｃｉｄ—ｃａｍｐｔｏｔｈｅｅｉｎｓ　ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　ａｎｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ［Ｐ］．ＵＳ　２００２／０１６２８５ＡＩ，２００２—０２一　Ｏ７．　的开发、应用价值。至于靶向制剂对大肠埃希菌的　抗菌机理，还有待进一步研究。　参考文献：　［１］徐风华，蒋雪涛．单克隆抗体靶向制剂的研究进展［Ｊ］．生物医　学工程研究，１９９７，１　７（５）；２６—２９．　［１Ｏ］　中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典：二部Ｉｓ］．　北京：化二【：出版社．２００５：７３０－７３１．　［１１］张均田．现代药理实验方法ｒＭ］．北京：北京医科大学中国协　和医科大合出版社，１９９８：１４０９—１４１５．　（下转第５２页）　［ｚ３朱久进，谢家庆．王远亮，等．高分子偶联靶向药物的研究进展　维普资讯 http://www.cqvip.com ５２　动物医学进展　２００８年第２９卷　第ｌ期（总第ｌ７３期）　液冷冻保存效果的影响【Ｊ］．黑龙江动物繁殖．２００７，（２）：１－３．　［５］高建明．虞桂平，邵ｌ　义．等．不同稀释液对猪精液常温保存效　果的影响ｒｓ］．中国畜牧杂志．２００７．１３：１２—１４．　［６］余良保．黄建国，黄建　．等．不同稀释液对猪精液常温保存的　影响ＦＪ］．．．ｋ海畜牧兽医通讯．２００６．（６）：４１．　［７］程文聪．刘春华．猪精液常温保存稀释液的筛选试验［Ｊ］．养殖　与饲料２００６，（８）：８—１１．　来源，增强心跳，更能促进维生素、氨基酸等在体内有　效的吸收和利用，增强免疫力。同时，脂肪酸可以为　精子、卵子提供能量，从而提高精子活力，提升卵子与　精子结合能力，有效提高种禽、种畜的受精率。　本研究表明，饲喂“雅士勇”口服液后，可以显著　地降低大白猪和长白猪的精子畸形率，可能是由于　口服液中的活性左旋肉碱、氨基酸和维生素等成分，　对精子的发生、成熟起到了积极的、有益的作用。但　［８］徐振军，任康，白桂芬，等．带精浆直接稀释法探讨猪精液低　温（４ｃ）保存的可行性［Ｊ］．广西农业生物科学，２００６，Ｓ１：２３－３０．　［９］郭洪杞，罗杰，王，等．猪精液稀释液常温保存研究［Ｊ］．　安徽农、　科学，２００５，（１２）：２３４４．　ｆ１Ｏ］项智锋，李培庆，张金洲，等．ＢＴＳ精液稀释液及保存时间对猪　具体这些营养成分是如何影响了精子的发生和成　熟，还需进行进一步的研究和探讨。　参考文献：　［１］姚桂东，陶　勇，章孝荣．维生素Ｂ　ｚ、Ｅ和Ｃ在家畜精液保存中　的应用［Ｊ］．动物医学进展，２００６，２７（３）：３６—３９．　人工授精效果的影响［¨．安徽农业科学．２００５，（１２）：２３４５—　２３４７．　［ＩＩ］　张　兰，范斌志，邓亮亮．不同贮存方法对猪精子活力效果的　观测［Ｊ］．畜牧兽医科技信息，２００６，（２）：５１—５２．　［１２］张灿槐．影响种公猪采精量因素探讨［Ｊ］．云南畜牧兽医１９９５，　（２）：２５．　［２］茆达于，杨利国，王元兴．不同稀释液对猪精液常温保存效果的　研究ｒＪ］．动物医学进展，２００２．２３（１）：７５—７８．　［３］金一．陈宠霞，方南洙，等．稀释液中添加海藻糖对猪冷冻精　ｒ１　液质量参数和活性氧的影响［Ｊ］．中国畜牧杂志，２００５．４１（１０）：　６－８．　［１　３］　罗旭劳，张守全，吴珍芳，等．工厂化猪场人工授精技术应用研　究［Ｊ］．江瓯农业大学学报；自然科学版，２００２，（４）：５１３—５１６．　江　涛．野种公猪的饲粮与饲养［Ｊ］．农村科技开发，２００２，　（４）：２３．　［４１魏世宝，金　一，苗婷婷．稀释液中添加Ｎ一乙酰半胱氨酸对猪精　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｓｃｏｔ　Ｃｏｕｒａｇｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｊ　ａｃｕｌａｔｅ　Ｖｏｌｕｍｅ　ａｎｄ　Ｓｐｅｒｍ　Ａｂｎｏｒｍａｌ　Ｒａｔｅ　ｉｎ　Ｂｏａｒ　ＷＡＮＧ　ＧＨＯ—ｆｕ　，ＧＡ０　Ｓｈｕ—ｘｉｎ　，ＳＨＡ０　Ｚｈｉ—ｗｅｎ　，ＬＩＵ　Ｍｉｎｇ—ｙｕ　，ＳＵ　Ｄａｏ　，ＭＡ　Ｙｕｎ。　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＡｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｙ－Ｔｏｎｇｌｉａｏ．ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ－０２８０４２，Ｃｈｉｎｋ；　２．ＧａｏＬｉｎＴｕｎ　Ｂｒｅｅｄｅｒ　ｍ　ｏＪ　Ｔｏｎｇｌｉａｏ　ｏＪ　ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ，Ｔｏｎｇｌｉａｏ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ，０２８０３７，Ｃｈｉｎａ＃　３．Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｙ　Ｎｉｎｇｃｈｅｎｇ　Ｃｏｕｎｔｙ　ｏＪ　ＣｈｉＪｅｎｇ　Ｃｉｔｙ－Ｎｉｎｇｃｈｅｎｇ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ，０２４２００．Ｃｈｉｎａ＃　４．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｙ　Ｈｕｏｌｉｎｇｕｏｌｅ　Ｃｉｔｙ　ｏＪ　Ｔｏｎｇｌｉａｏ，Ｈｕｏｌｉｎｇｕｏｌｅ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ，０２９２００，Ｃｈｉｎａ；　５．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏＪ　Ａｎｉａｌｍ　Ｓｃｉｅｍｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ，７１２１Ｏ０，Ｃｈｉｎｋ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｌｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ａｓｃｏｔ　Ｃｏｕｒａｇｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｊａｃｕｌａｔｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｒｍ　ａｂｎｏｒｍａｌ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｂｏａｒ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗａｓｎ＇ｔ　ｆｅｄ　ｔｈｅ　Ａｓｃｏｔ　Ｃｏｕｒａｇｅ　Ｌｉｑｕｉｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｆｅｄ　ｔｈｅ　ｄｉｅｔ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　２５，３０　ｍＬ／ｄ　Ａｓｃｏｔ　Ｃｏｕｒａｇｅ　Ｌｉｑｕｉｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ａｓｃｏｔ　Ｃｏｕｒａｇｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　ｏｎ　ｅｊａｃｕｌａｔｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｂｏａｒ　ｉｓｎ　ｔ　ｏｂｖｉｏｕｓ（Ｐ＞０．０５），ｂｕｔ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｏｎ　ｓｐｅｒｍ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ　ｒａｔｅ，ｔｈａｔ　ｓｐｅｒｍ　ａｂｎｏｒｍａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｂｏａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０１），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐｅｒｍ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　２（Ｐ＞０．０５）．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｅｊａｃｕｌａｔｅ　ｖｏｌｕｍｅ；ｓｐｅｒｍ　ａｂｎｏｒｍａＩ　ｒａｔｅ；ｂｏａｒ　鬻夺　豢啼矗矗夺矗枭诛　精靠书毒矗　夺舟矗夺矗矗束啼夺啼夺啼木泰泰啼　啼杂赤舟舟枭靠艰舟夺靠矗矗豢毒杀杀杀舟杀啼　（上接第３８页）　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅ／ｎ　ｖｉｔｒｏ　ＺＨＵＯ　Ｒｕ－ｙｉ，ＤＯＮＧ　Ｗｅｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｕ，ＳＵＮ　Ｚｈｉ－ｉｉａｎｇ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏＪ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｌｃｌｎｅ，ＨｕｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ・Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ・４１０１２８，Ｃ＾ＩｎＫ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ－ｓｅｒｕｍ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｊ　ｕｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｐｅｃｉａｌ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ａｇｅｎｔｉａ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｉｎｔｏ　Ｆａｒｇｅｔｅｄ　Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｅｕ—　ｔｉｃａｌ　ｐｈａｒｍａｃｙ　ａｎｄ　ｂｅｆｉｔｔｉｎｇ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ａｎ—　ｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｎ　Ｅ．ｃｏｌ　ｔｈａｔ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ．Ｒｅｓｕｈｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｉｎｉ－　ｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆ　Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　Ｓｕｌｆａｔｅ　ｗａｓ　０．０２／￣ｇ／ｍＬ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｗａｓ　０．４￣ｇ／ｍＬ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｓｕｐｅｒｉｏｒｅｒ　ｔｈａｎ　Ｇｅｎｔａｍｙ—　ｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ；Ｅ．ｃｏｌｉ；ＭＩＣ