第４１卷第２２期 ２０１３年１１月 广州化工 Ｖｏ１．４１ Ｎｏ．２２ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ．２０１３ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ 亚硝基草甘膦高效液相色谱法定量分析研究 周玉良，蔡黎克，杨新东 （山东胜邦绿野化学有限公司，山东 济南 ２５０２０４） 摘 要：通过试验优化了亚硝基草甘膦的外标法定量分析。建立了亚硝基草甘膦的快速定量测定方法，样品经硫酸水溶液 来处理，高效液相色谱外标法定量。结果表明方法的标准偏差为０．０４；变异系数为２．９８％；平均回收率为９７．３１％～９９．４２％，线 性范围为２５—２００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ，最低检测限为５ ｐ￣ｇ／ｍＬ，该方法简便快速而易于操作。适用于草甘膦原药生产对亚硝基草甘膦的质量控 制。 关键词：亚硝基草甘膦；高效液相色谱；定量分析 中图分类号：ＴＱ４５７．２＋７ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１－９６７７（２０１３）２２－０１１１－０３ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｉｔｒｏｓｏ Ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ｂｙ ＨＰＬＣ ＺＨＯＵ Ｙｕ—ｌｉａｎｇ，ＣＡＩ Ｌｉ—ｋｅ，ＹＡＮＧ Ｘｉｎ—ｄｏｎｇ （Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｖｉｃｏｍｅ Ｇｒｅｅｎｌａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｊｉｎａｎ ２５０２０４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｅ ｎｉｔｒｏｓｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ｑｕａｎｔｉｉｆｅｄ ｂｙ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎｉｔｒｏｓｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ｒａｐｉｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｂｙ ｔｈｅ ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｔｏ ｄｅａｌ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ０．０４，ｃｏｅｆｉｆｃｉｅｎｔ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ２．９８％，ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．３１％～９９．４２％，ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ２５—２００ ｇ／ｍＬ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｆ０ｒ ５ ｇ／ｋｇ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｑｕｉｃｋ ａｎｄ ｅａｓｙ ｔｏ ｏｐｅｒａｔｅ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｔｒｏｓｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｎｉｔｒｏｓｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ；ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 亚硝基草甘膦是草甘膦原药生产过程中产生的一种杂质， 与草甘膦的合成工艺有着紧密的联系，作为草甘膦原药中的 杂质，亚硝基草甘膦在国际标准（ＦＡＯ）和我国的国家标准中 都有检验指标要求 ｊ，而采用不同的生产工艺生产的草甘膦 整合，得到通过液相色谱法快速而准确检测草甘膦原药中亚硝 基草甘膦的方法。 １ 实验部分 １．１试剂和溶液 磷酸二氢钾（优级纯），天津化学试剂厂；磷酸（分析纯）， 天津化学试剂厂；甲醇（色谱纯），天津四友化学试剂有限公 司。 原药，引进原药里面的杂质也不相同，文献报道关于草甘膦 的测定方法较多，主要有气相色谱法 、液相色谱法 “ 、 分光光度法 等，这对亚硝基草甘膦的检测增加了一定的 难度。 亚硝基草甘膦的现有检测方法即ＧＢ １２６８６—２００４草甘膦 原药中４．５，其方法为试样用流动相溶解，以ｐＨ ２．０的磷酸 二氢钾水溶液和甲醇为流动相，使用以Ａｇｉｌｅｎｔ ＺＯＲＢＡＸ ＳＡＸ 为填料的不锈钢柱（强阴离子交换柱）和紫外检测器（２４２ ｎｍ） 草甘膦原药，山东胜邦绿野化学有限公司生产；亚硝基草 甘膦标样（质量分数９７．６％），北京颖新泰康科技有限公司。 １．２仪器 对亚硝基草甘膦进行高效液相色谱的分离和测定，此检测亚 硝基草甘膦的分析方法并不理想，其过高的磷酸缓冲盐浓度 极易造成色谱柱的堵塞，给检测工作带来不便。亚硝基草甘 膦结构式： ＬＣ—ＩＯＡＴ高效液相色谱仪；色谱柱为Ｗｈａｔｍａｎ ＰＡＲＴＩＳＩＬ１０ ＳＡＸ强阴离子交换柱（内径２５０ ｍｍ ｘ ４．６ ｍｍ），日 本岛津；Ｔｕ一１８００普析通用紫外可见分光光度计；ＨＳ１０２６０Ｄ 超声波清洗器，天津恒奥；石英亚沸蒸馏器，江苏金坛玻璃仪 器有限公司；摩尔超纯水机，上海摩勒生物科技有限公司；精 密ｐＨ计，上海雷磁仪器厂；精密分析天平，瑞士梅特勒托利 多公司。 ： ｆ Ｏ＝＝＝Ｎ 通过试验对国家标准中检测亚硝基草甘膦的方法进行优化 １．３液相色谱操作条件 流动相：二次重蒸水用８５％磷酸调ｐＨ至１．９６，０．４５ ｍ 滤膜过滤后，超声波中超声１０ ｍｉｎ； 作者简介：周玉良（１９７８一），男，职称：中级，主要从事农药（除草剂）原药、中间体及制剂的分析与检验工作。 １ｌ２ ２０１３年１１月 稀释液：０．１ ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液，去离子水配制； 流量：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：室温；检测波长：１９８ ｎｍ；进 样体积：２５ Ｌ；保留时间：２．５ ｍｉｎ。 上述液相色谱条件的操作，系典型操作参数，可根据不同 式中：Ａ。——标样溶液中亚硝基革甘膦的峰面积的平均值 Ａ ——试样溶液中亚硝基草甘膦的峰面积的平均值 ｍ ——亚硝基草甘膦标样的质量，ｇ ｍ：——试样的质量，ｇ Ｐ——标样中亚硝基草甘膦的质量分数，％ 注：所测结果单位为ｍｇ／ｋｇ。 仪器特点对给定操作参数做适当调整，以期获得最佳效果。典 型的亚硝基草甘膦标样和草甘膦原药的高效液相色谱图（图１、 图２）。 ３结果与讨论 ３．１ 色谱条件的选择 图１ 亚硝基草甘膦标样高效液相色谱图 Ｆｉｇ．１ ｃｈｒｏｍａｔ。 ａｍ ｏｆ ａ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｉｔｒｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ １ ｌ ｌ 唼ｌ 亩ｌ ｌ ｌ ｌ １ ！ ，、 一 Ｌ八 ｔ／ｒａｉｎ 图２草甘膦原药高效液相色谱图 Ｆｉｇ．２ Ｃｈｒ０ｍａｔ。 ａｍ ｏｆ ａ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｈｏｓａｔｅ ＴＣ ２测定步骤 ２．１ 标样溶液的配制 ２．１．１ ５０ ｍｇ／Ｌ标准储备液液的配制 称取０．０５ ｇ（精确至０．０００２ ｇ）亚硝基草甘膦标样，置于 １０００ ｍＬ棕色容量瓶中，用０．１ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液稀释至刻度，摇 匀，备用。 ２．１．２ １ ｍｇ／Ｌ标样溶液的配制 从５０ ｍｇ／Ｌ的标准储备液中移取２ ｍＬ溶液，置于１００ ｍＬ 棕色容量瓶中，用０．１ Ｍ硫酸溶液定容至刻度，配成１ ｍｇ／Ｌ 标样溶液。 ２．２样品溶液的配制 称取２ ｇ（精确至０．０００２ ｇ）草甘膦的试样，置于１００ ｍＬ棕 色容量瓶中，用０．１ Ｍ硫酸溶液稀释至刻度，超声冷却过滤， 备用。 ２．３测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标 样溶液，直到相邻两针标样溶液的响应值相对变化小于１．５％ 为止。按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序 进行测定。 ２．４计算 将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中亚硝 基草甘膦峰面积分别进行平均，亚硝基草甘膦的质量分数Ｘ。 按式（１）计算： 通过普析通用Ｔｕ一１８１０紫外可见分光光度计的光谱扫描 功能，获得亚硝基草甘膦的紫外波长扫描图（图３），通过紫外 分光光度计的光度测量功能，获得了光度测量数据（表１）。所 得结果不同于草甘膦的亚硝化反应 Ｊ，由于采用高纯水来处理 样品，通过比较将检测波长定为１９８ ｌｌ＇ｍ。 图３ 亚硝基草甘膦紫外光谱扫描图 Ｆｉｇ．３ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ Ｎｉｔｒｏｓｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｓｃａｎ 表１ 亚硝基草甘膦光度测量 Ｔａｂｌｅ １ Ｎｉｔｒｏｓｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ 色谱柱选择为常用的Ｗｈａｔｍａｎ ＰＡＲＴＩＳＩＬ１０ ＳＡＸ强阴离子 交换柱（内径２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ），依据草甘膦的物化性质，用 硫酸水溶液来处理样品，并选择磷酸水溶液作为流动相。将带 有磷酸二氢钾和磷酸不同配比作为缓冲盐溶液的流动相在色谱 柱上进行试验，最终确定流动相为高纯水用８５％磷酸调ｐＨ至 １．９６，在此条件下，亚硝基草甘膦能从草甘膦原药中得到较好 的分离，且峰形对称，基线平稳，分析时间短。 ３．２分析方法的线性相关性试验 和测定限 ３．２．１ 分析方法的线性相关性试验 Ｃ／（ｍｇ／ｋｇ） 图４亚硝基草甘膦的校正曲线 Ｆｉｇ．４ Ｎｉｔｒｏｓｏ ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ＣＨＩＶｅ 第４１卷第２２期 周玉良等：亚硝基草甘膦高效液相色谱法定量分析研究 表３分析方法的准确度试验 Ｔａｂｌｅ ３ Ａｃｃｕｒａｃｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｌ１３ 准确移取２．１．１中配制５０ ｍｓ／Ｌ标准储备液０．５ ｍＬ、 １．０ ｍＬ、２．０ ｍＬ、３．０ ｍＬ、４．０ ｍＬ于１００ ｍＬ容量瓶，用 ０．１ ｍｏＬ／Ｌ硫酸溶液稀释后得到０．２５ ｍｇ／ｋｇ，０．５ ｍｇ／ｋｇ， １ ｍｇ／ｋｇ。１．５ ｍｇ／ｋｇ，２ ｍｇ／ｋｇ系列浓度的标准工作溶液，每次 进样２５ 分析。以所得峰面积对浓度进行线性回归，得回归 方程：Ｙ＝１．２６８６Ｘ＋０．０２４３，相关系数ｒ＝０．９９９２，线性范围 ２５～２００ ｍＬ（图４）。 ３．２．２方法的测定限 分别以５ ｇ／ｍＬ的亚硝基草甘膦溶液连续进样五次，测得 其信噪比都大于３，满足检测限信噪比都大于３的要求，将 ５ ｇ／ｍＬ作为亚硝基草甘膦的检测限。根据基线噪音的３倍得 出：样品的称重量为２．０ ｇ，溶剂为２５ ｍＬ时，方法的最低检测 限为５ ｇ／ｍＬ（Ｓ／Ｎ＝３）；分别以１０ ｇ／ｍＬ的亚硝基草甘膦溶 液连续进样五次，测得其信噪比都大于１０，满足定量限信噪比 都大于１０的要求，因此将１０／￣ｇ／ｍＬ定义为亚硝基草甘膦的定 量限。 ４ 结论 试验结果表明，本方法的准确度和精密度较高，线性关系 良好，操作简单，方便省时，是草甘膦原药生产中亚硝基草甘 膦质量控制检测较理想的方法。 参考文献 ［１］草甘膦原药ＧＢ １２６８６—２００４［Ｓ］．北京：中国标准出版社，２００４． 『２］ ＲＯＹＥＲ Ａ．ＢＥＧＵＩＮ Ｓ，ＴＡＢＥＴ ＪＣ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ａｎｄ Ａｍｉｎ０ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈ０ｎｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｒａｔｅｒ ｂｙ Ｇａｓ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ Ｔａｎｄｅｍ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ａｆｔｅｒ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｉｏｎ ３．３分析方法的精密度试验 采用上述方法对草甘膦原药的同一个样品平行测定五次， 测得亚硝基草甘膦的标准偏差为０．０４，变异系数为２．９８％（表 ２） 表２分析方法的精密度实验结果 Ｔａｂｌｅ ２ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ Ｒｅｓｉｎ Ｐｕｒｉｉｃａｔｉｆｏｎ ａｎｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｎ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｍａｔｉｒｘｅｓ ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，７２（１）：３８２６—３８３２． ［３］ ＮＥＤＥＬＫＯＳＫＡＴＶ，ＬＯＷ ＧＫ Ｃ．Ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｎｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ｉｎ ｗａｔｅｒ ａｎｄ Ｐｌａｎｔｍａｔｅｒｉａｌ ａｆｔｅｒ Ｐｒｅ—ｃｏｌｕｍｎ． ３．４分析方法的准确度试验 称取５份一定量的试样，分别准确加入１ ｍＬ ２．１．１中配制 的标准溶液，在上述色谱操作条件下进行分析，测得亚硝基草 ［４］胡宝祥，莫卫民，孙楠．ＥＬＳＤ—ＨＰＬＣ联用测定制剂中草甘膦的含 量［Ｊ］．农药，２００５，４４（８）：３６—３６７． ［５］董文庚，陈学诚，郎志敏，等．褪色分光度法测定草甘膦［Ｊ］．分析化 学，１９９７，２３（１０）：１２１０—１２１２． ［６］ 薛铭华，杨万兴．Ｎ一亚硝基衍生物的紫外分光光度法测定草甘膦 ［Ｊ］．农药，１９８２（２）：３１～３２． ［７］ 孙楠，胡宝祥，莫卫．草甘膦的亚硝基化单扫描示波极谱法测定及 其应用［Ｊ］．农药，２００７，９（９）：６１０—６１１． ［８］朱彭龄．分析方法的验证［Ｊ］．分析测试技术与仪器，２００９，１５（４）： ２５６—２６】． 甘膦的平均回收率为９７．８８％（表３）。 （上接第９６页） ［６］ 彭书传，谢晶晶，庆承松，等．负载ＴｉＯ：凹凸棒石光催化氧化法处 理酸性品红染料废水［Ｊ］．硅酸盐学报，２００６，３４（１０）：１２０８—１２１２． ［７ Ｊ Ａ．ＭＭｔ、ｍｅｚ—Ａｒｉａｓ，Ｍ．Ｆｅｍ＂ａｎｄｅｚ—Ｇａｒｅ、，Ｏ．Ｇａ、Ｉｖｅｚ，ｅｔ ａ１．Ｊ． Ｃａｔａ１．２０００．１９５：２０７—２１６． ［９］ 梁达文，白守礼，杨东，等．纳米ＣｕＯ／ＣｅＯ：制备、表征及对甲烷燃 烧催化活性［Ｊ］．北京化工大学学报，２００５，３２（３）：７３—７６． ［ＩＯ］宋伟，师瑞娟，刘俊龙，等．ＣｅＯ，负载的Ｃｕ，Ｉｒ和Ｐｄ催化剂上的醇 ［８］ Ｖ．Ａ．Ｓａｄｙｋｏｖ，Ｔ．（；．Ｋｕｚｎｅｔｓｏｖａ，Ｇ．Ｍ．Ａｌｉｋｉｎａ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｒｉａ— ｂａｓｅｄ ｆｌｕｏｒｉｔｅ一】ｉｋｅ ｏｘｉｄｅ ｓｏｌｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ａｓ ｃａｔａｌｙｓｔｓ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ｓｙｎｇａｓ ｂｙ ｔｈｅ ｌａｔｔｉｃｅ ｏｘｙｇｅｎ：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， 转移脱氢反应［Ｊ］．催化学报，２００７，２５（２）：１０６—１０８． ［１ １］李虎，罗立文，于慧征，等．丁硫醚在Ｃｅ—ＨＺＳＭ一５分子筛上的转 化反应研究［Ｊ］．化工科技，２００６，１４（１）：５—８． ［１２］Ｋａｓｐａｒ Ｊ，Ｆｏｍａｓｉｅｒｏ Ｐ，Ｇｒａｚｉａｎｉ Ｍ．Ｕｓｅ ｏｆ ＣｅＯ２一ｂａｓｅｄ ｏｘｉｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ—ｗａｙ ｃａｔａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｔａｌｙｓｉｓ Ｔｏｄａｙ，１９９９，５０：２８５—２９８． ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｅｒｆｏｒｏｌａｎｃｅ［Ｊ］．Ｃａｔａ］．Ｔｏｄａｙ，２００４，９３—９５： ４５—５３．
