ELISA法与免疫膜条法检测抗MDA5抗体、抗TIF1γ抗体的比对分析

,,,国际检验医学杂志２０１９年５月第４０卷第９期　IntJLabMedMa０１９Vol．４０No．９y２

论著􀅰临床研究

抗TELISA法与免疫膜条法检测抗MDA５抗体、IF１γ抗体的比对分析

２

,李柳冰１,刘晨曦１,张艳芳１,程琳琳１,晏颂欣１,李永哲１△

∗

()中国医学科学院北京协和医院检验科,北京１吉林大学第一医院检验科,吉林长春１１．００７３０;２．３００２１目的　比较酶联免疫吸附试验(和免疫膜条法检测抗黑色素瘤分化相关基因５(抗　　摘　要:ELISA)MDA５)

(体和抗转录中介因子１抗体结果的差异性.方法　选取日本MBγTIF１γ)L公司生产的抗MDA５抗体和抗

,与德国欧蒙公司抗肌炎抗体谱I免疫膜条法)同时检测１TIF１γ抗体试剂盒(ELISA法)G检测试剂盒(８０例g

皮肌炎血清样本中的抗MD比较这两种方法的差异性.结果　两种方法检测到的两A５抗体和抗TIF１γ抗体,

).两种方法检测结果的一致性有统计学意义(,种抗体阳性率,差异均无统计学意义(但一P＞０．０５P＜０．００１)).结论　E致性一般(抗MD抗TA５抗体:Kaa值＝０．６６０;IF１γ抗体:Kaa值＝０．６４２LISA法和免疫膜pppp条法检测抗MD以提高检测的准A５抗体和抗TIF１γ抗体的一致性程度一般.免疫膜条法有待进一步改善,确性.抗体

关键词:酶联免疫吸附试验;　免疫膜条法;　抗黑色素瘤分化相关基因５抗体;　抗转录中介因子１γ

文献标识码:A中图法分类号:R４４６．６

:/DOI１０．３９６９．issn．１６７３Ｇ４１３０．２０１９．０９．００２j

()文章编号:１６７３Ｇ４１３０２０１９０９Ｇ１０２８Ｇ０４

:AbstractObective　TocomarethedifferencebetweenenzmeＧlinkedimmunosorbentassaELISA)pyy(j

)andalineblotassaindetectinntiＧmelanomadifferentiationＧassociatedprotein５(MDA５antibodndanＧygaya

tiＧtranscritionalintermediaractor１γ(TIF１γ)antibod．Methods　TheantiＧMDA５antibodndantiＧpyfyya,tectantiＧMDA５antibodndantiＧTIF１γantibodn１８０serumsamlesofdermatomositisandthedifferＧyayipyencesbetweenthetwomethodswerecomared．Results　Therewasnosinificantdifferenceinthepositivepg

)ratesbetweenELISAandlineblotassas(P＞０．０５．Theconsistencftheresultsofthetwomethodswasyyo,statisticallinificant(P＜０．００１)whichwasmoderateforantiＧMDA５antibodKaa:０．６６０)andantiＧysgy(ppTIF１γantibodKaa:０．６４２)．Conclusion　AmoderateconsistencetweenELISAandlineblotwasy(ybppaccurac．y

:;;KeordsELISA;　lineblot　antiＧmelanomadifferentiationＧassociatedprotein５antibod　antiＧtranＧyyw

１]

.肌炎特异度自表现的异质性疾病,女性患者居多[

(１．DeartmentolinicalLaboratorPekinnionMedicalColleeHosital,pfCy,gUgpPekinnionMedicalColleeandChineseAcademedicalSciences,Beiin００７３０,China;gUgyofMjg１

,２．DeartmentolinicalLaboratortheFirstHositaloilinUniversitChanchun,Jilin１３００２１China)pfCy,pfJy,g∗

ComarisonanalsisofantiＧMDA５antibodndantiＧTIF１γantibodetweenELISAandlineblotassaspyyayby

１１１,２１△

,LILiubinLIUChenxiZHANGYananCHENGLinlin１,YANSonxin１,LIYonzheg,fg,ggTIF１γantibodit(ELISAmethod)producedbLComanfJaanandtheantiＧmositisantibodykyMBpyopyy

)sectrumIGdetectionkit(lineblotmethodroducedbonComanfGermanereselectedtodeＧpgpyOmpyoyw

foundforantiＧMDA５antibodndantiＧTIF１γantibod．Thelineblotassahouldbeimrovedtoenhanceitsyayyspscritionalintermediaractor１γantibodpyfy

是以对称性四肢近端肌无力为特征　　皮肌炎(DM)

);).中国医学科学院医学与健康科技创新工程服务一带一路战略先导科研专项资助项目(３Ｇ００１２０１７ＧI２MＧB&RＧ０１mch＠１２６．com.

∗);基金项目:国家自然科学基金资助项目(中国医学科学院医学与健康科技创新工程资助项目(８１６７１６１８,８１８７１３０２,８１５０１４１３２０１７ＧI２MＧ

:李柳冰,女,博士研究生,主要从事自身免疫性疾病遗传风险因素和诊断标志物研究.　△　通信作者,　　作者简介:EＧmailonzheliuygp]李柳冰,刘晨曦,张艳芳,等．抗T国际检验医学杂　　本文引用格式:ELISA法与免疫膜条法检测抗MDA５抗体、IF１γ抗体的比对分析[J．

():志,２０１９,４０９１０２８Ｇ１０３１．

,,,国际检验医学杂志２０１９年５月第４０卷第９期　IntJLabMedMa０１９Vol．４０No．９y２

􀅰１０２９􀅰

)身抗体(与疾病临床分型、临床特征相关,可有MSAs

２Ｇ４]

.免疫膜条法能效辅助皮肌炎的诊断和预后评估[

/(测样品吸光度值－标准品１吸光度值)标准品２吸/UmL为阳性.

１．３．２　免疫膜条法　抗肌炎抗体谱IG检测试剂盒g包含抗MDA５抗体和抗TIF１γ抗体.将检测膜条放入温育槽中,并在每槽中加入１．摇５mL样本缓冲液,.吸去缓冲液,床温育５m在每槽中加入１．in５mL经物,摇床温育３０min后清洗３次.再在每槽中加入

有效快速地进行多个自身抗体的检测,在临床检测中

]５

,的应用越发广泛.然而,有研究指出[采用免疫膜

光度值－标准品１吸光度值)×１００.样本浓度＞３２

(条法检测自身抗体,会出现以下情况:多个自身抗１)抗体)的检测结果与其他方法(如免疫沉淀法)得到的检测结果存在较大不一致情况.基于此,本文分别用酶联免疫吸附试验(法和免疫膜条法检测皮ELISA):肌炎患者血清中的两种M抗黑色素瘤分化相关SAs

()()基因５抗体和抗转录中介因子１抗MDA５γTIF１γ

()体出现假阳性;免疫膜条法对自身抗体(如抗J２oＧ１

清洗３１０１倍稀释血清样本.摇床温育３０min后,

.随后,次,每次５m在每槽中加入１．in５mL酶结合摇床温育１吸去液体,蒸馏水１．５mL底物,０min后,

体,探讨这两种方法检测抗MDA５抗体和抗抗体结果的差异性.

TIF１γ

　资料与方法．１　一般资料　本研究纳入的１８０例皮肌炎患者,来源于北京协和医院和卫生行业科研专项资助下的多家医院.其中男平均(CDM４３)１．０４００±例１,８．６４５)９例,女岁.皮肌１２炎１例,年龄中包括经２典~皮７６岁,(无肌病性皮肌炎(肌幼炎年JDM)２９例,皮肌炎合C并A恶D性M)肿１１例,型皮肌炎(瘤(CAMe０例.r诊断CD标M和准[６ＧJ７

]D,M患者均符合So且nthJ１９７５年Bohan/PeＧ

)

eDiM的发病年龄mer诊断标准８.＜１CAM８岁.

ADM患者符合[]

患者中对于恶性肿瘤的诊断均符合相应临床诊断标准.同时,排除合并其他自身免疫性疾病的皮肌炎患者.本研究已获得北京协和医院伦理委员会批准.．２　仪器和试剂　日本MBL公司抗测试剂盒７８７;３肌炎抗体T谱E和抗TIF１γ抗体(批号:７MDA５抗体(批号:)德国欧蒙公司抗８５３)ELISA检ICg

AGN酶联免疫检测仪;检测试剂盒(批号:G);欧蒙印记法自动操作仪;EUROLinDeSLc１a５n３０欧蒙印Ｇ１６０１Ｇ迹法判读软件.

．３　方法剂盒、抗G检测T试I　本研究采用的抗F１剂γ抗体盒分别EL是IS同A试M剂DA盒５抗体及抗肌E炎LI抗SA试体谱批号试剂.血清标本于－g

８０℃低温保存并避免了反复冻融.实验过程中严格按照试剂说明书进行操作并对实验条件、检测仪器、实验人员等因素进行严格质量控制.

．３．１　ELISA法　按照抗抗体ELIS释A检测试剂盒说明M书DA要５抗体和抗求,用样本稀TI释F１液γ０１倍稀血清样本.在相应微孔中分别加入的血清样本L标准品１.、标准品室温(２２０、℃阳性对照~３０℃、)阴性对照和稀释过１００

次,加入１０温育３温育３,０洗板min

４,次后洗板加入.１于００TEμCL０底μL酶结合物,物,温育AN酶联免疫检测仪波长在１５min后０m加入in

１００μL终止液.待测样本的浓度值(U４５０nmLm)处检测各孔吸光度值/＝(待清洗Maste３次.于欧盟印迹法自动操作仪(r)检测结果.着色强度＞１５为阳性E.UROBlotＧ１．４　统计学处理分析.率的比较采用　采用χ２检验SPS,S以２０．０软件进行统计学

两种方法的一致KaP＜０．０５为差异有统

计学意义.同时进行以P＜０性a一致性分析,．０１认为pp具有统计学意义.Kappa值一致性一般≥０．７５,为一致性好;Kaa值＜;K０a．ppa值在０．４０~＜０．７５,为２　结２．１　E　　果

pp

４０为一致性差.LISA法和免疫膜条法的检测结果　如表１所

示,抗阳性率分MD别A５抗体用为义(P＝０．７２６的)２阳.９．性抗４４ELISA法和免疫膜条法检测的率T％和I分F１别γ２７抗．７体８％用,为E差LI异SA无统法计和学免意疫膜条法检测异无统计学意义(２８．３３％和２０．５６差　　P＝０．０８６

表１两种方法检测抗)　　　抗体阳性率的比较

M.％,DA５抗体和抗TIF１γ

EL免疫膜条法抗体类型阳性阴性ISA法阳性率阳性阴性阳性率P值

MDA５(n５)１(n)(％)

(n１２２７９２２９８．．４３４３５)抗TIF１γ抗体

５３１

３０７

１(n)１３４０３２(抗体％)

抗２７０．．２５８６００．．７０２８６６

２．２　ELISA法和免疫膜条法对抗MDA５抗体检测

结果的符合情况法检测出３９例免疫膜条法检测结果与５３例抗　如表MDA５２所示,抗体阳性皮肌炎患者１８０例样本中,E,LI其中SA有(３．５８％(３９５３)ELISA法相符,阳性符合率为７/,阴性符合率为９１．３４％总符１１６/合１２率７)为.８两种方法对于抗６．１１％(１５５/１８M０D验:KaDpAp５a值抗体的检测结果的一致性有统计学意义＝０．６６０(P＜０．００)１.A５抗体检测结果的

),K认ap为pa一致性检抗M两种方法,对但一致性一般.

２．３　ELISA法和免疫膜条法对抗TIF１γ抗体检测

结果的符合情况法检测出５１例抗　如表TIF１γ３所示,抗体阳１８性０例样本中,皮肌炎患者E,L其IS中A有３２例免疫膜条法检测结果与ELISA法相符,

阳性１１４tC１４１I１１μ

４􀅰１０３０􀅰

,,,国际检验医学杂志２０１９年５月第４０卷第９期　IntJLabMedMa０１９Vol．４０No．９y２

(/).两种方法对于抗T１２４１２９IF１γ抗体检测结果的

/.K总符合率为８６．６７％(１５６１８０)aa一致性检pp,验:认为两种方法对Kaa值＝０．６４２(P＜０．００１)pp抗T但IF１γ抗体的检测结果的一致性有统计学意义,一致性一般.

表２　　两种方法对抗MDA５抗体检测结果的比较(n)

免疫膜条法阳性ELISA法阳性３９阴性１１

总计５０

/,符合率为６阴性符合率为９２．７５％(３２５１)６．１２％

对免疫沉淀法和免疫膜条法对抗OJ抗体检测结果的

]１５

.９例用免疫沉淀法证实有抗O差异性[J抗体存在

的血清,用免疫膜条法的检测结果均为阴性;５２例用免疫沉淀法证实不存在抗O用免疫膜J抗体的血清,条法的检测结果均为阴性.免疫膜条法对抗OJ抗体、、比对免疫沉淀法和免疫膜条法对抗MiＧ２αMiＧ２β、MD、TIF１γA５、NXP２、SAE、KuPMＧScl７５、PMＧ的灵敏度为０％,特异度为１００％.CAVAZZANA等

、、Scl１００、SRP、PLＧ７、PLＧ１２、EJOJJoＧ１抗体检测结果]５

.研究显示,的一致性[两种方法对抗TIF１γ抗体、

阴性１总计

５４３

１１１２６７

１１３８００

表３　　两种方法对抗TIF１γ抗体检测结果的比较(n)

免疫膜条法ELISA法阳性阴性总计阳性３阴性１２１５

３７

总计

５９１

１２２４９

１１４８３０

　讨　　论

　　抗度抗体,M对D皮A５抗体和抗肌炎的诊断TI具F１有γ抗体均为皮肌炎特异

重要意义.抗抗体最先于日本皮肌炎患者的血清中发现,该抗体阳MDA５性患者具有典型的皮肤受累如手掌丘疹、皮肤溃疡,且发生快速进展型肺间质病变的风险增加

[９

]原MDA５是一种维甲酸诱导基因I样受体,

参与抗病.靶抗

毒先天免疫防御,可识别出柯萨奇病毒、鼻病毒、登革热病毒和牛痘病毒等病毒类型

[９

][１０

]皮肌炎患者组与２２１例健康对照.组LI等对进行皮肌炎相关m,

eta６２分８例

析,结果发现抗MDA５抗体与尤其是与合并灵敏度是ADM密切相关.抗MDA５抗体对C度是特征曲线下面积是１００％(９５６％２C％I(０:９９５．９７％４％~CI.抗１:５０２T０％~ADIF％１γ),７抗体最早于综合受试者工作０％),M诊断的

合并特异年报道,在成年皮肌炎患者中的阳性率是２０２００６０％,在JDM患者中的阳性率为[１％１Ｇ１２~

]

靶抗原TI[１F３１]

γ发挥转录调节、肿瘤抑制３０％、~４DN０A％损伤修.复等功能

密切相关,抗.F１γ抗体与皮肌炎合并恶性肿瘤

会出现恶性T肿I抗F瘤１TγI抗体阳性患者中,超过[３,１４]

５０％患者

助手段IF１γ抗体是皮肌炎诊.断可和见鉴抗别诊M断DA不５抗体和抗

可忽视的辅

.

目前,检测皮肌炎自身抗体多采用免疫膜条法.免疫膜条法由于具有简便快速等优势ELISA法和

,越来越多地应用于临床检测中.然而,文献报道指出,免疫膜条法存在一些弊端.HAMAGUCHI等比

抗MDA５抗体和抗NXP２抗体检测的一致性好,对抗抗JMoiＧＧ１２α抗体检测的一致性差/β抗体和抗EJ抗体检测的一致性一般,对.

前期,本研究采用的抗盒的检测结果与金标准免疫TI沉F１淀γ抗体法进行EL了IS比A试剂对[

１６]

E,ELLIISSA法的敏感度和特异度均为A法和免疫膜条法检测皮肌炎患１００％者.血本清文中采的用

抗MDA５抗体和抗TIF１γ抗体,并对两种方法的检测结果进行比对分析,结果表明,和抗ELI.本研究及前期研究TI结F１γ抗S体A法和免疫膜条法对抗MDA５抗体检测的一致性一般果显示,免疫膜条法与

ELISA法、

免疫沉淀法的检测符合度并不十分一致.可见,尽管这３组方法都能检测自身抗体,相对于操作要求不高,省时快捷的免疫膜条法,当遇到免疫膜条法ELISA法和免疫沉淀法检测结果更准确.因此,检测的自身抗体结果和患者临床特征不符的情况时,可采用重新检测EL,I从而SA法或免疫沉淀法对患者血清标本进行确认检测结果,更好发挥自身抗体检测对临床的价值.

在本研究中,一致可能是由于免疫膜条法本身的缺陷所致ELISA法和免疫膜条法结果不完全

,如膜条法上重组抗原纯度不够或者失效,导致免疫膜条法假

(阴性结果的出现;此外,也可能是由于实验环境因素

敏感如温度,尤其是对)的影响于.弱有研究指出[１７]阳性和阴性的,免疫膜条法对温度

标本,随着实验环境温度的升高,膜条的显色加深,从而导致假阳性结果的出现.基于此,当采用免疫膜条法进行实验时,应先评价该方法的准确性,探讨周围环境对实验结果的影响,从而保证检测结果的准确性.

４　　　结本研究结果表明　　论

,DA５抗体和抗条法能有TIF效１EγLI抗体的一致性程度一般SA法和免疫膜条法检测抗M.虽然免疫膜节约时间,但仍需不断进行改善,以提高其检测的准确性.参考文献

[１]１H１O９tOhEGENMNDICJiKJEnterna,tAMAionalwTOorkAshAop,L:trEiCalKdYesiBg

nRin,etaadullt．

３C３T,,,国际检验医学杂志２０１９年５月第４０卷第９期　IntJLabMedMa０１９Vol．４０No．９y２

􀅰１０３１􀅰

[],:tientswithdermatomositisJ．Oncotaret２０１７,８(１６)yg２６５５２Ｇ２６５６４．

,idioathicinflammatoroathieswiththeexcetionofpymypp

,,inclusionbodositis１０Ｇ１２October２００３,Naardenymy[]李柳冰．]肌炎特异性自身抗体研究进展[中华内科杂２J．[]MCHUGHNJ,３TANSLEYSL．AutoantibodiesinmoＧy[]L４UNDBERGIE,DEVISSERM,WERTHVP．ClassifiＧ

２６９Ｇ２７８．

[],():sitisJ．NatRevRheumatol２０１８,１４５２９０Ｇ３０２．[],:cationofmositisJ．NatRevRheumatol２０１８,１４(５)y:formositissecificautoantibodiescomarisonbetweenypp[],seraJ．JImmunolMethods２０１６,４３３:１Ｇ５．():志,２０１７,１２５６９５８Ｇ９６１．３３７Ｇ３４５．

[],:TheNetherlandsJ．NeuromusculDisord２００４,１４(５)

[]R１１IDERLG,NISTALAK．TheuvenileidioathicinflamＧjp

():２８０１２４Ｇ３８．

,],bodhenotesandoutcomes[J．JInternMed２０１６,ypyp:toantibodiesanimortanttooltosuortdianosisofpppg:,matoroathiesathoenesisclinicalandautoantiＧymyppg

[１２]BETTERIDGEZ,MCHUGHN．MositisＧsecificauＧyp[],():mositisJ．JInternMed２０１６,２８０１８Ｇ２３．y

[１３]WOLSTENCROFTPW,FIORENTINODF．DermatoＧ

[]C,５AVAZZANAIFREDIM,CERIBELLIA,etal．Testing

lineblotandimmunoreciitationassasin５７mositisppyy[]B６OHANA,PETERJB．PolmositisanddermatomosiＧyyy

)[],tis(secondoftwopartsJ．NEnlJMed１９７５,２９２g():８４０３Ｇ４０７．

[]B７OHANA,PETERJB．PolmositisanddermatomosiＧyyy[]S８ONTHEIMERRD．WouldanewnamehastentheacＧ

cetanceofamoathicdermatomositis(dermatomosiＧpypyy

)tissinemositisasadistinctivesubsetwithintheidioＧy３４４Ｇ３４７．

[１４]FUJIMOTOM,WATANABER,ISHISUKAY,etal．

[],():iesJ．CurrOinRheumatol２０１６,２８６６３６Ｇ６４４．pRecentadvancesindermatomositisＧsecificautoantibodＧyp

,():Re２０１８,２０５２８．p

mositisclinicalandpatholoicalphenotesassociatedygyp

[]withmositisＧsecificautoantibodiesJ．CurrRheumatolyp

[]HAMA１５GUCHIY,KUWANAMandTAKEHARAK．

[]animmunoreciitationassandlineblotassaJ．Modppyay[１６]FUJIMOTOM,MURAKAMIA,KUREIS,etal．EnＧ

,():Rheumatol２０１７,２７３５５１Ｇ５５２．

ComarisonofantiＧOJantibodetectionassasbetweenpydy

)[],:tis(firstoftwopartsJ．NEnlJMed１９７５,２９２(７)g

zmeＧlinkedimmunosorbentassasfordetectionofantiＧyytranscritionalintermediaractorＧ１gammaandantiＧMiＧpyf():２０１６,８４３２７２Ｇ２８１．

[],２autoantibodiesindermatomositisJ．JDermatolSciyH,etal．UseofacommerciallineblotassasascreenＧya

athicinflammatorermatomoathiessectrumofclinＧpydypp

[],:icalillnessJ．JAmAcadDermatol２００２,４６(４)６２６Ｇ[]MO９GHADAMＧKIAS,ODDISCV,AGGARWALR．AnＧ

,():RheumatolRe２０１８,２０１２７８．p６３６．

[,,１７]RONNELIDJBARBASSOHELMERSSSTORFORS

]tiＧMDA５antibodectruminwesternworld[J．Currysp

inestforautoantibodiesininflammatoroathiesgtymyp

[],():J．AutoimmunRev２００９,９１５８Ｇ６１．

()收稿日期:２０１８Ｇ０９Ｇ１４　修回日期:２０１８Ｇ１１Ｇ０２

[]L１０IL,WANGQ,YANGF,etal．AntiＧMDA５antibodsya

apotentialdianosticandpronosticbiomarkerinpaＧgg(上接第１０２７页)

[],():sesisJ．JThrombHaemost２０１８,１６２２３１Ｇ２４１．p

[]KO,５CAADAMB,SANLIERN．CurcuminanactivecomＧ

　　cellsandtheirinteractionsinthrombusformationduring

[]AHMA,,９DISHARMASGUPTAN,etal．AntithromＧ

,,,boticpotentialofesculin７,３′４′５′６′ＧOＧentasulfatep[],bosismodelJ．IntJBiolMacromol２０１８,１１９:３６０Ｇ３６８．()EPSforitsroleinthrombusreductionusinatthromＧgr

[]KA,６RIMIANMSPIRROM,MAJEEDMA．Curcumin

[],teinＧ１J．CtokineGrowthFactorRev２０１７,３３:５５Ｇ６３．y

２８９５．

,onentofturmeric(Curcumalona)anditseffectsonpg

[],:healthJ．CritRevFoodSciNutr２０１７,５７(１３)２８８９Ｇ

[]HA,,１０SANM,LATIFISKAHNCJetal．Thepositive

[],tureofprimarorticalneuronsJ．MarDrus２０１８,１６ycg[]肖志勇．]姜黄提取物对小鼠肝纤维化的影响[生物技１１J．[]周丽娟,赵军宁,徐海波,等．不同来源姜黄提取物的抗肝１２

５７．

():术通讯,２０１８,２９４５１６Ｇ５２０．():７２１８．

roleofcurcuminＧloadedsalmonnanoliosomesontheculＧp

asanaturalreulatorofmonoctechemoattractantproＧgy:ducedmicrolialinflammatorresonsesinvitroInvolveＧgyp/[]mentofERK１２andp３８sinalinathwasJ．NeurosＧggpy

[,７]SHIX,ZHENGZ,LIJetal．CurcumininhibitsAＧinＧβ

,ciLett２０１５,５９４:１０５Ｇ１１０．

]:损伤药效学研究[中药药理与临床,J．２０１５,３１(２)５５Ｇ

[]WO８JCIKM,KRAWCZYKM,WOJCIKP,etal．MolecuＧ

[]周丽娟,赵军宁,徐海波,等．不同商品规格,等级姜黄提１３

():１１１０Ｇ１１２．

larmechanismsunderlinurcuminＧmediatedtheraeuticygcp,Lonev２０１８:９６９８２５８．g

]取物抗氧化作用比较研究[中药药理与临床,J．２０１６,３２

]effectsinte２diabetesandcancer[J．OxidMedCellyp

()收稿日期:２０１８Ｇ０９Ｇ１８　修回日期:２０１８Ｇ１１Ｇ０６