GB6017.1-20起重机械安全规程-第1部分
lipofectamine3000 protocol 中文版
1.接种细胞至70-90%汇合度时转染
2.使用Opti-MEM培养基稀释Lipofectamine®3000试剂(2管)，充分混匀
3. 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，制备DNA预混液，然后添加P3000™试剂，充分混匀。 4. 在每管已稀释的Lipofectamine®3000试剂中加入稀释的DNA (1:1比例)。 5. 室温孵育5分钟。
6. 加入DNA-脂质体复合物至细胞中。 7. 37℃孵育细胞2 - 4天。然后分析转染细胞。 siRNA转染
转染siRNA至细胞中时，遵循如上所述的DNA实验方案，但在稀释siRNA时不要 加入P3000™试剂(第3步)。
细胞培养容器 贴壁细胞 96-well 24-well 6-well 1–4 × 104 105 0.5–2 × 106 25 μL × 2 2 0.25–1 × Opti-MEM培养基稀释Lipofectamine®3000试剂（2管） 0 Opti-MEM培养基稀释DNA，制备DNA预混液，然后添加P3000™试剂，充分混匀 Lipofectamine®3000试剂中加入稀释的DNA (1:1比例) Opti-MEM培养基 5 μL × 2 125 μL × Lipofectamine®3000.150.3 μL 和0.751.5 μL 和3.757.5 μL 和Opti-MEM培养基 DNA (0.5–5 μg/μL) P3000™ 试剂(2 μL/μg DNA) 稀释的DNA 稀释的10 μL 0.2 μg 0.4 μL 50 μL 1 μg 2 μL 250 μL 5 μg 10 μL 5 μL 5 μL 25 μL 25 μL 125 μL 125 μL Lipofectamine® 3000 室温孵育5分钟 1h
GB6017.1-20起重机械安全规程-第1部分
加入DNA-脂质体复合物至细胞中 物 37°C孵育细胞2–4天。然后分析转染细胞。 DNA-脂质体复合96-well 24-well 6-well 表1：使用lipofectamine®3000转染DNA产品参考用量 10 μL 50 μL 250 μL （新工艺、新装置、新技术、新产品）
培训主题 培训日期 主办部门 主讲人 培训地点 课 时 培训人数 2h
GB6017.1-20起重机械安全规程-第1部分
培训主要内容 1． 新工艺、新装置、新技术、新产品的特性； 2． 工艺技术要求、注意事项； 3． 存在的风险及防范措施； 4． 工艺规程、设备、岗位安全操作规程及事故应急处理； 5． 实操培训。 参加培训人员签名 培训效果
3h
