山东医药２００９年第４９卷第ｌｌ期 白血病抑制因子对急性脊髓损伤模型大鼠后肢 运动功能及ＧＦＡＰ表达的影响 吴秀荣 ，高红娜 ，王慧丽 ，马锋振。 （１滨州职业学院，山东滨州２５６６０３；２滨城区区直机关医院；３滨州医学院附属医院） ［摘要］ 目的探讨白血病抑制因子（ＬＩＦ）对急性脊髓损伤（ＡｓｃＩ）的保护作用。方法 将３６只大鼠随机分 为观察组和对照组各１８只。观察组采用ＡＵｅｎ ８打击法建立ＡｓｃＩ模型并以微量注射器分别向损伤处及手术野头、 尾侧注射ｌＯ０ ｎｇ／ｍｌ的ＬｌＦ溶液６ ；对照组仅注射等量生理盐水。术后ｌ ｄ、１周、１个月分别采用ＢＢＢ分级法及 改良Ｔ盯ｌ０ｖ法评估两组后肢运动功能，采用免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）表达。结果 随术后时间 延长，两组后肢运动功能均有所恢复，但术后ｌ周及１个月观察组ＢＢｓ分级评分显著高于对照组，术后１个月观察 组改良Ｔａｒｌｏｖ法评分显著高于对照组；两组ＧＦＡＰ表达均有升高趋势，但观察组术后１周和１个月观察组ＧＦＡＰ均 显著高于对照组。结论 ｕＦ对脊髓损伤有一定保护作用，可能机制为促进神经元生长及其他神经营养因子分泌 和表达，改变神经轴突生长方式。 ［关键词］ 白血病抑制因子；脊髓损伤，急性；运动功能；胶质纤维酸性蛋白 ［中图分类号］ Ｒ６４２ ［文献标识码］ Ｂ ［文章编号］ １０ｏ２．２６６ｘ（２ｏｏ９）ｌ１．００５４＿ｏ２ 急性脊髓损伤（ＡｓＣＩ）是一种严重的致残性疾 照组仅注入同等剂量的生理盐水。两组术后均抗感 病，主要致病原因为高处坠落、交通意外等。目前， 染，３ ｄ内进行人工膀胱排尿３次／ｄ，防治泌尿系统 有关白血病抑制因子（ｕＦ）神经保护作用的研究成 感染，正常喂食，饮水，保持动物存活４周。 为热点。国外细胞培养及动物实验研究均已经证 １．３后肢运动功能观察ＡＳＣＩ模型建立后１ ｄ、１ 明，ＬＩＦ可增加皮质脊髓束的生长速度，改变轴突再 周、１个月分别根据ＢＢＢ分级法及改良Ｔａｒｌｏｖ法评 生方式，并促进神经营养因子一３（ＮＴ一３）等表达，促 估两组后肢运动功能。ＢＢＢ分级法评定标准：后肢 进受损脊髓功能恢复¨ｊ。国内相关报道鲜见。２００８ 全瘫为０分，完全正常为２１分，两者之间根据功能 年ｌ２月，我们建立了大鼠ＡｓｃＩ模型，并观察了ｕＦ （关节活动的数目和范围，负重程度及前后肢协调 局部注射对其后肢运动功能和胶质纤维酸性蛋白 性，前、后爪和尾部的活动情况）分别定为１～２Ｏ （ＧＦＡＰ）表达的影响。现报告如下。 分。改良Ｔａｒｌｏｖ评分标准：无自主性运动为Ｏ分；仅 １材料与方法 限于髋膝关节的非反射性运动为１分；髋、膝、踝三 １．１ 材料 成年雄性ｗｉｓｔａｒ大鼠３６只，体质量 个主要关节运动为２分；能主动支持体质量和不协 ２００～２５０ ｇ。重组大鼠ＬＩＦ（北京中吴时代生物技术 调步态，或偶尔出现协调步态为３分；前肢和后肢协 公司），１％Ｈ ０ 一甲醇、０．１％胰酶、马血清、ｌ：５００ 调的步态，行走时有趾间关节的运动为４分；正常步 ＧＦＡＰ单抗（Ｓｉｇｍａ公司）、ｌ：２００生物素酰化二抗、１ 态为５分。 ：ｌ００的ＳＡＢＣ复合物。 １．４ ＣＦＡＰ表达测定采川免疫组织化学法。经石 １．２动物分组及ＡｓｃＩ模型建立将３６只大鼠随 蜡包埋损伤脊髓组织切片，脱蜡浸水，ｌ％Ｈ：０：一甲醇 机分为观察组和对照组各１８只。观察组采用Ａｌ— 处理３０ ｍｉｎ，０．１％胰酶３７℃２０ ｍｉｎ，马血清封闭３７ ｌｅｎ ｓ打击法建立ＡＳＣＩ模型：在硬膜表而垫一曲皮 ℃３０ ｍｉｎ，１：５ｏｏＧＦＡＰ单抗（Ｓｉｇｍａ公司）４ ｑＣ ２４ ｈ， 与脊髓一致的２．２ ｍｍ×５ ｍｍ弧形光滑金属 片， ｌ：２Ｏ０生物素酰化二抗３７ ４５ ｍｉｎ，ｌ：ｌＯ０的ＳＡＢＣ 用重ｌ５ ｇ的砝码于ｌ０ ｃｍ处 直落下打击垫片致 复合物３７℃４５ ｍｊｎ，ＳＡＢｃ染色，Ｍａｙｏｒ苏木素复 脊髓造成中度损伤（鼠尾痉挛摆动及躯体 缩扑 染，晾ｆ土寸片。染色过程中除正常血清外 均需 动，双卜肢瘾痪，表明撞击成功），止血，生理盐水冲 ０．０ｌ ｍｏｌ／Ｉ｜的ＰＢｓ洗３次。采用医学图像分析系 洗，以微量注射器分别向损伤处及手术野头、尾侧注 统，『１ｊ摄像机将ＥＵ片组织图像输人到计算机，每张切 射ｌＯ０ ｎ ｍ１的Ｉ ＴＦ溶液６ １，０ 戮逐层缝合。埘 片随机选取５个脊髓切片视野，选择切片的空白区 ５４ 山东医药２０ｏ９年第４９卷 ｌｌ 调整灰度，对细胞阳性物质进行二态化处理和图像 修正，４Ｏ倍物镜下由计算机系统算出吸光度（Ａ）， 即抗原的相对含量，反应染色强度，以任意单位 （ＡＵ）表示。 失。多种神经生长因子具有促进损伤神经元存活、 分化和轴突再生的作用，使损伤后脊髓组织结构的 完整性能得到最大的保存 ３ Ｊ。ＧＦＡＰ存在于正常和 反应性星形胶质细胞中，是星形胶质细胞的一种标 志蛋白，其表达水平可反应星形胶质细胞增殖、肥大 和坏死程度，而星形胶质细胞增殖是神经再生的重 １．５统计学方法采用ＳＰＳＳ１２．Ｏ统计软件进行统 计学处理。计量资料采用样本￡检验，Ｐ≤ Ｏ．Ｏ５为差异有显著性意义。 ２ 结果 要表现，检测ＧＦＡＰ表达可评估神经再生情况。 多种神经生长因子具有促进损伤神经元存活、 分化和轴突再生的作用，使损伤后脊髓组织结构的 完整性能得到最大的保存。＿４ 本资料显示，随术后 时间延长，两组后肢运动功能均有所恢复，但术后１ 伤后ｌ ｄ两组均表现为双后肢瘫痪，行为学无 明显差异；ｌ周时观察组后肢功能明显优于对照组； １个月时观察组已经能够行走，对照组则行走困难。 两组术后不同时间点后肢运动功能评分及ＧＦＡＰ表 达情况见表ｌ。 表１ 两组术后不同时间点后肢运动功能评分 及ＧＦＡＰ表达情况（ｉ±ｓ） 组别 ｎ 法Ｇ ｕ 周观察组ＢＢｓ分级评分显著高于对照组，术后１个 月观察组ＢＢＳ分级法评分及改良Ｔａｒｌｏｖ法评分显 著高于对照组；两组ＧＦＡＰ表达均有升高趋势，但观 察组术后ｌ周和１个月ＧＦＡＰ均显著高于对照组。 提示ｕＦ可降低脊髓损伤后星形胶质细胞的反应 性，从而减少脊髓纤维化，促进神经功能恢复。本实 验还发现，经染色的细胞质周围新生突起的密度增 加，并有较长的神经突起存在，表明ＬＩＦ能够改变神 经突起的生长速度和生长方式，但机制不明。 综上所述，原位注射ＬＩＦ对脊髓损伤有一定保 护作用，可能机制为促进神经元的生长及其他神经 营养因子的分泌和表达，改变神经轴突生长方式。 由于ＬｌＦ是一种多功能细胞因子，在体内可对多系 统产生多种作用，其在脊髓损伤患者中的临床应用 前景还有待于进一步证实。 ［参考文献］ ［１］ｗｉＩｌｉａｍ ＢＪ，ｃａ肫ｒ｜ｙ，ＮａｆａＩｉｅ Ｊ．Ｇａｒｄｉｎｅｒ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｏ． ｒｙ Ｆ ｃｔ０ｒ Ｄｅｔｅｍｉｎｅｓ ｔｈｅ Ｃｍ ｈ Ｓｔａｔｕｓ Ｄｆ Ｉｎｊｕ－ｅｄ Ａｄｕ１ｔ Ｓｅｌ１８０ｒｙ 注：与对照组比较， Ｐ＜０．Ｏ５． Ｐ＜Ｏ．Ｏ１ ３讨论 急性不完全性脊髓损伤发生时，脊髓的解剖连 续性完好，脊髓功能部分丧失，临床为不完全性截 瘫。脊髓损伤后会发生一系列的原发性和继发性病 理生理改变 Ｊ。原发损伤是脊髓组织遭受机械性 外力损伤后瞬间引起的组织损害，为发生出血、水 肿、微循环障碍、退变以至坏死等继发性改变的根 本。继发性损伤是由原发性损伤激发的一系列病理 因素参与的组织进行性、自毁性破坏过程，其对组织 的破坏程度甚至可超过原发性损伤。由于原发性损 Ｎｅｕｒ０ｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｍｓｃｉ，２０ｏｌ，２１（１８）：７ｌ６ｌ－７１７０． ［２］周宏艳，赵宏波，杨军．褪黑素对大鼠急性脊髓损伤的保护作用 ［Ｊ］．中国康复医学杂志，２ｏ０７，２２（９）：７９９－８０１． ［３］秦晓东，王道新，曹晓健，等．外源性神经生长因子对脊髓损伤后 运动神经功能的影响［Ｊ］．江苏医药，２ｏｏ６，３２（１１）：１Ｏ３４．１ｏ３６． ［４］鲁凯伍，陈哲宇，侯铁胜，等．脂质体介导胶质细胞源性神经营养 因子基因转染对大鼠脊髓损伤后神经功能的影响［Ｊ］．上海医 学，２ｏ０３，２６（１）：４８ ０． （收稿日期：２ｏ０９＿０１ Ｄ７） 伤是不可避免的，ｌ临床治疗的关键是尽量预防和治 疗继发性损伤，从而降低病死率和减少神经功能丧 ・告读者・ 关于统计学符号的应用说明 按ｃＢ３３５８—８２《统计学名词及符号》的有关规定书写，常用统计学符号的书写如下：①样本的算术平均数 用英文小写 （中位数仍用 ）；②标准差用英文小写 ；③￡的检验用英文小写ｆ；④Ｆ检验用英文大写Ｆ；⑤ 卡方检验用希文小写 ；⑥相关系数用英文小写ｒ；⑦自由度用希文小写＂；⑧概率用英文大写Ｐ。以上符号 均用斜体。 ５５
